菰（Zizanialatifolia）ISSR反应体系的建立及优化.pdfVIP

植物遗传资源学报２０１４，１５（６）：１３９５⁃１４００ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ：１０．１３４３０／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｐｇｒ．２０１４．０６．０３４ 菰（Ｚｉｚａｎｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ）ＩＳＳＲ反应体系的建立及优化 １，２，３ ３ ３ ３ １ ３ １ ２ 吴国林 ，王惠梅 ，黄奇娜 ，奉保华 ，江绍琳 ，吴建利 ，黄长干 ，江绍玫 １ ２ ３ （ 江西农业大学，南昌３３００４５； 江西财经大学，南昌３３００４５； 中国水稻研究所，杭州３１０００６） 　 　 摘要：菰是一种稻族野生资源，水生或沼生，在我国有着广泛的分布。 野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源，同时 还有着巨大的生态作用。 为建立适宜于菰的ＩＳＳＲ反应体系，以菰 ＤＮＡ基因组为模板对ＩＳＳＲ反应体系中的主要影响因子进 ２＋ 行优化。 采用单因素变量法在１２ 个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中ｄＮＴＰｓ 浓度、Ｍｇ 浓度、Ｔａｑ 聚合酶浓度、引物 浓度、模板ＤＮＡ浓度及引物退火温度等６ 个因子进行优化，确定了在２０ μＬ ＩＳＳＲ反应体系中各组分的最适因素水平分别为： ２＋ ３．０ ｍｍｏｌ Ｍｇ （１０×Ｂｕｆｆｅｒ），０．５ ｍｍｏｌ ｄＮＴＰｓ、１．０ μｍｏｌ 引物浓度、０．２４ Ｕ／ μＬ Ｔａｑ 聚合酶、１．５ ｎｇ／ μＬ ＤＮＡ模板以及５５ ℃退 火温度。 应用该优化体系对８０ 个菰材料进行扩增，证实了该体系的适用性和稳定性，为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供 了技术支撑。 　 　 关键词：菰；ＩＳＳＲ；居群 Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ＩＳＳＲ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｉｌｄ⁃ｒｉｃｅ Ｚｉｚａｎｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｇｒｉｓｅｂ （Ｔｕｒｃｚ） １，２，３ ３ ３ ３ ＷＵ Ｇｕｏ⁃ｌｉｎ ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉ⁃ｍｅｉ ，ＨＵＡＮＧ Ｑｉ⁃ｎａ ，ＦＥＮＧ Ｂａｏ⁃ｈｕａ ， １ ３ １ ２ ＪＩＡＮＧ Ｓｈａｏ⁃ｌｉｎ ，ＷＵＪｉａｎ⁃ｌｉ ，ＨＵＡＮＧ Ｃｈａｎｇ⁃ｇａｎ ，ＪＩＡＮＧ Ｓｈａｏ⁃ｍｅｉ １ ２ （ ＪａｎｇｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５； Ｊｉａｎｇｘｉ Ｆｉｎａｎｃｉａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５； ３ Ｃｈｉｎａ ＮａｔｉｏｎａｌＲｉｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００６） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｌｄ ｒｉｃｅ Ｚｉｚａｎｉａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｇｒｉｓｅｂ （Ｔｕｒｃｚ），ａｎ ａｑｕａｔｉｃ／ ｗｅｔｌａｎｄ ｇｅｎｕｓ，ｉｓ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｒｉｂｅ Ｏｒｙｚｅａｅ ｗｉｄｅｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ａｃｒｏｓｓ Ｃｈｉｎａ．Ｚ．ｌａｔｉｆｏｌｉａ ｉｓ ｎｏ