荧光第二部分.ppt

5. 细胞内钙离子探针 80年代初，Roger Tsien合成Quin-2 Indo-1, Fura-2, Fluo-3 6、葡萄糖探针 7、氧气探针 笼锁型荧光素标记微管蛋白 注入肾上皮细胞，结合到有丝分裂的纺锤体中 观察到有丝分裂中期微管在着丝点聚合，在两极附近解聚 七、荧光传感 探针 Fluorescence turn-on 检测特定生成物 1. 探针法 2. Fluorescence turn-on 双(8-羟基喹啉-5-磺酸）钾- Pd2+体系测定S2- 3. 检测特定生成物 高香草酸在过氧化物酶催化下，被过氧化氢氧化，生成荧光物质；可以用于检测过氧化氢 结合氧化酶，可以检测对应底物 荧光寿命法测定氧气 铂配合物，荧光寿命：61.4 μs 7、“笼锁”型荧光探针 Photoactivatable/ caged probes 最大限度影响分子的活性位点或结合位点 =360nm，μs-ms内可以解离 多具有临位硝基苯基团 5种常见笼锁基团 DMNB-caged fluorescein zebrafish Ag2O纳米颗粒 Caged quantum dots J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 15811–15813. J. Am. Chem. Soc., 2009, 131 (7), 2432-2433 Hoechst 33258，33342，34580 DAPI 358/461nm；20倍增强；细胞半透性 其他DNA探针 嵌入剂；细胞凋亡 2、细胞活性检测 酶活性 细胞通透性 氧化（还原）能力 其他：膜电位、离子释放、胞内自由基改变、ATP…… 凋亡、耐药性、毒性…… 酶活性检测试剂 原理：酯酶活性 钙黄绿素的醋酸酯 BCECF酯 荧光素酯 细胞通透性检测 原理：不透性DNA荧光探针 SYTOX Green, orange, blue 花青类 EtBr, PI及其衍生物 SYTO类 氧化（还原）能力检测 原理：检测细胞氧化（还原）能力 刃天青 二氢罗丹明、二氢荧光素等 Red CC-1 (540/600nm) 3、活性氧 OH*、*O2- TEMPO-9-AC Proxyl fluorescamine 荧光自旋阱 NO基团：猝灭荧光 荧光恢复，ESR消失 单线态氧 YF: 0.9%－13.8%; ?: 0.8－1.29ms trans-1-(2′-Methoxyvinyl)pyrene 灵敏（pmol）;选择性好，不与其他活性氧反应 过氧化物和过氧化物自由基 二氢荧光素 二氢罗丹明 Hoechst 33342;FM595。 FM595，细胞膜和内涵体，红； 二氯荧光素酯，绿色； Hoechst，核，蓝色 Hoechst 33258，蓝色，核 Dihydrorhodamine 123，绿色，线粒体 溶酶体标记，红色 NO NO检测原理 NO NO＋ 活性氮氧化物 可以被胺类捕获，生成重氮盐或芳香族二胺 NO＋ DAF-FM；YF0.005-0.81；最佳 J. Am. Chem. Soc., 2009, 131, 11692–11694 试剂 目标 荧光 2,3-diaminonaphthalene NO＋ 1H-naphthotriazone 1,2-diaminoanthraquinone NO＋ 红色荧光 NBD methylhydrazine NO2- 468/537nm 硝基酪氨酸抗体 硝基酪氨酸 ONOO- 4、pH 荧光素，490/450 nm BCECF，pKa=6.98; 490/440nm Roger Tsien，1982年合成 Fura-2，比例检测，紫外激发，比例成像。 左图：神经细胞 最灵敏的检测方法 罗丹明123是荧光探针，在过氧化物酶的作用下和过氧化氢反应 DAF-FM：4-amino-5-methylamino-2′,7′-difluorofluorescein二乙酯 Fe(III)配合物 * 过氧化硝酸盐 单阴离子和双阴离子的形态有荧光，QY分别为0.37和0.93.pKa1, ~2.1; pKa2, 小于5；pka3, 6.4 最常用的胞内pH荧光探针。535nm处吸收 硼酸基团和临位二羟基有特异性结合， 氧气对很多荧光试剂的猝灭是动态猝灭 DNA block building 二聚体没有荧光，单体有NIR荧光 荧光强度可以增强400倍；LOD：2.0 ppb 检出限2μM 荧光 II 六、荧光探针 DNA探针 细胞活性 活性氧 pH 金属离子（Ca） 葡萄糖 “笼锁”型 1、DNA检测 花箐类 菲啶、吖啶类 吲哚、咪唑类 其他 探针和DNA结合方式 静电作用 嵌入作用 小沟