基于易错PCR技术的黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA的定向进化.pdf

生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 4 研究报告 年第 期 基于易错PCR 技术的黏质沙雷氏菌 脂肪酶基因LipA 的定向进化 陈英 朱绮霞 张搏 陈东 黄日波 ( ， 530007 ) 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物炼制重点实验室 南宁 : PCR LipA ， 摘 要 利用易错 技术对黏质沙雷氏菌脂肪酶基因 进行定向进化 经过筛选最终获得一个比活力比野生酶 425 U / mg ep1， ep1 5 ， ep1 pH 8. 5 提高了 的突变体 测序分析 有 个氨基酸发生了突变 与野生酶相比 的最适 值由原来的 降低为 7. 5 ，Tm 3℃ ，Km 40 mg / mL 12. 5 mg / mL 。 ， 值提高 值由原来的 降低为 对其三维结构进行分析 推测酶学性质的改变可能与处 I58A 、 S375G 。 在活性中心右前方双螺旋发卡结构上的 和处在下部β 卷曲折叠拐角处的 的突变有关 : PCR 关键词 黏质沙雷氏菌 脂肪酶 易错 定向进化 Directed Evolution of Serratia marcescens Lipase Gene by Error-prone PCR Chen Ying Zhu Qixia Zhang Bo Chen Dong Huang Ribo (State Key Laboratory of Non-Food Biomass and Enzyme Technology ，National Engineering Research Center f or Non-Food Bioref inery ，Guangxi Academy of Science ，Guangxi Key Laboratory of Bioref inery ，Nanning 530007) Abstract : Directed evolution to Serratia marcescens Lipase gene-LipA by Error-prone PCR was carried out ，and a final mutant ep1 was obtained whose specific activity increased 425 U / mg than the wild type． Sequence analysis showed that ep1 had 5 amino acid muta- tion