大肠杆菌nmpC基因的快速敲除.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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大肠杆菌nmpC基因的快速敲除.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2013 5 大肠杆菌 nmpC 基因的快速敲除 1 2 1 1 张丹凤陈国平华秀庭陈阳（1. 漳州师范学院生物科学与技术系，漳州 363000 ；2. 漳州市农业局种植业管理站，漳州 363000）摘要 : 旨在利用Red 重组系统和Xer 重组系统获得大肠杆菌NmpC 外膜蛋白基因删除菌株。采用PCR 扩增nmpC 基因片段，构建pMD- 载体， R I 酶切并经补平酶切缺口后与difGm 片段连接，得到重组质粒T-nmpC ∷difGm ，PCR 扩增获得突变 nmpC Eco Pfu 盒：：difGm ，电转化突变盒片段入大肠杆菌细胞，PCR 扩增验证是否获得没有抗性标记的 Δ 基因删除菌株。结果显示， nmpC nmpC 成功构建了重组质粒T-nmpC ∷difGm ，在Red 重组酶和Xer 重组酶的介导下，进行同源重组和抗生素标记去除，并经PCR 验证得到 Δ 基因删除菌株。首次成功获得大肠杆菌 Δ 无抗生素标记基因删除菌株，该基因删除菌株可为深入研究NmpC 的功 nmpC nmpC 能提供研究基础。关键词 : Red 重组系统 Xer 重组系统大肠杆菌 NmpC Rapid Deletion of nmpC Gene in Escherichia coli Chromosome 1 2 1 1 Zhang Danfeng Chen Guoping Hua Xiuting Chen Yang （1. ，， 363000 ；2. Department of Biological Sciences and Biotechnology Zhangzhou Normal University Zhangzhou Planting Management ，， 363000 ） Station Zhangzhou Agriculture Bureau Zhangzhou Abstract: It was to obtain the nmpC deleted strain of E. coli by using both Red and Xer recombination system. The sequence of nmpC from E. coli K-12 BW25