人血白蛋白的原核表达及其应用.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第11期 人血 白蛋白的原核表达及应用 1，3 1，2 3 3 3 3 2 李向茸   冯若飞   谢晶莹  田伟  杨妍梅  王丹  马忠仁 （1. 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室，兰州 730030 ；2. 甘肃省动物细胞工程技术研究中心，兰州 730030 ； 3. 西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730030） 摘 要 ： 旨在构建人血白蛋白（HSA ）基因的原核表达载体pGEX-4T-1-rHSA ，诱导表达后纯化重组HSA 蛋白，制备多克 隆抗体并对其进行鉴定。根据GenBank 发表的HSA （NM_000477.5 ）的核苷酸序列设计合成1 对特异性引物，以人胚肺二倍体细 胞的总RNA 为模板，利用RT-PCR 扩增HSA 基因，将其克隆至pGEX-4T-1 载体，构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-rHSA ，经 PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 （DE3 ），进行IPTG 诱导表达，表达产物经变性、复性、亲和层析纯化后作为免 疫原制备多克隆抗体，应用间接ELISA 和Western-blot 方法对所得抗体进行检测。结果表明，重组蛋白主要以包涵体的形式存在， 分子质量为92 kD ；重组蛋白具有良好的反应原性和免疫原性 ；应用其制备的抗血清效价达到1 ∶100 000 ；纯化的多克隆抗体与血 源人血清白蛋白和重组人血白蛋白均能产生特异性结合，具有良好的生物学活性。 关键词 ： 人血清白蛋白 原核表达 包涵体 多克隆抗体 Prokaryotic Expression and Application of Recombinant Human Serum Albumin 1，3 1，2 3 3 3 3 2 Li Xiangrong Feng Ruofei Xie Jingying Tian Wei Yang Yanmei Wang Dan Ma Zhongren （1. The Key Bio-engineering and Technology Laboratory of Nationality Commission ，Northwest University f or Nationalities ，Lanzhou 730030 ； 2. Gansu Engineering Research Center f or Animal Cell ，Lanzhou 730030 ；3. Lif e Science and Engineering College of Northwest University f or Nationalities ，Lanzhou 730030 ） Abstract:  This study was aimed to express and purify the protein of pGEX-4T-1-rHSA in prokaryocytes and prepare anti-HSA polyclonal antibody. The HSA gene was amplified from human embryo lung diploid total RNA by RT-PCR, with primers based on the published HSA （