香樟Actin基因的克隆及其表达分析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 5 :120-127 香樟 Actin 基因的克隆及表达分析 李勇鹏  张力维  姚瑶  黄蕊  杜丽 （南阳师范学院生命科学与技术学院，南阳 473000） 摘 要 ： Actin 作为一个看家基因，经常在实时定量PCR 中被用作内参对不同样品中的mRNA 进行定量，因此在基因表达 分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法，根据GenBank 中已经公布的其他植物的Actin 基因的保守序列设计简并引物，采 用RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）技术从香樟中获得了4 个cDNA 片段。分子生物学分析软件分析结果 显示，4 个片段大小为均为998 bp，编码332 个氨基酸 ；同源性分析表明，所获得的片段属于Actin 亚家族，分别命名为CcACTa、 、 和 并提交GenBank（登录号：KM086736、KM086737、KM086738 和KM086739）。 实时定量PCR 结果显示， CcACTb CcACTc CcACTd CcACTc 在根、茎、叶及低温处理的叶片中表达量相对稳定，可以作为候选内参基因。 关键词 ： 香樟 ； ；基因克隆 ；表达分析 ；实时定量PCR Actin DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.05.019 Cloning and Expression Analysis of Actin Gene in Cinnamomum camphora Li Yongpeng Zhang Liwei Yao Yao Huang Rui Du Li （School of Life Science and Technology ，Nangyang Normal University ，Nanyang 473000 ） Abstract: As a house-keeping gene, Actin has been always being used as an internal standard to normalize mRNA levels between different samples by quantitative real-time PCR, thus plays an important role in gene expression analysis. In this research, through a method of homology cloning, a pair of degenerate primers were designed based on the conserved sequences of Actin genes from other plants submitted to GenBank, and then 4 cDNA fragments from Cinnamomum camphora were obtained using RT-PCR. Molecular biological analysis showed that, each of the 4 cDNA fragments was 998 bp and encoded a putative protein of 332 amino acids. Moreover, according to the homology analysis, the 4 cDNA