草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及其初步应用.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及其初步应用.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2014 6 草鱼细胞系 CIK 酵母双杂交 cDNA 文库的构建及初步应用 1 1 1 燏1 2 1 1 闫秀英谢吉国李杰丁吴灶和鲁义善简纪常（1. 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088 ；2. 仲恺农业工程学院，广州 510225）摘要：旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用，运用SMART 技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK （ kidney ）的酵母双杂交cDNA 文库。提取CIK 细胞总RNA 后，分离纯化mRNA ，然后以mRNA 为模板， Ctenopharyngodon idellus 反转录合成cDNA 第一链，再在DNA 聚合酶作用下，通过长距离PCR ，扩增双链cDNA 。利用SMART 技术，通过同源重组的方法， 5 6 在酵母株Y 187 中构建了草鱼CIK 细胞全长cDNA 文库。经检测，未扩增文库的转化率为1.6 ×10 ，文库容量为2.4 ×10 ，插入的双链cDNA 片段的长度为250-2 000 bp ，文库滴度为7 ×107 CFU/mL ，重组率为98% ，此文库具有良好的cDNA 片段多态性和完整性。利用构建的CIK 酵母双杂交文库，以草鱼呼肠孤病毒的VP7 和VP5 蛋白作为诱饵进行筛选试验，得到VP7 相互作用蛋白的阳性菌落，未得到VP5 相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK 细胞酵母双杂交cDNA 文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。关键词：草鱼肾组织细胞系酵母双杂交 cDNA 文库蛋白质互作 - Construction and Preliminary Application of the Yeast Two hybrid cDNA Library from Grass Carp CIK Cells 1 1 1 1 2 1 1 Yan Xiuying Xie Jiguo Li Jie Ding Yu Wu Zaohe Lu Yishan Jian Jichang （1. Guangdong Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiolo