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生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期
2014 12
人乙醛脱氢酶 2 的原核表达及其活性的鉴定
黄娟 王荷花 张小骥 潘博宇 陈孝平 吴元欣
（武汉工程大学化工与制药学院 绿色化工过程教育部重点实验室，武汉 430073）
摘 要 ： 商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取，其来源受到很大的限制，而且价格昂贵。为了解决
乙醛脱氢酶原料有限的问题，利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶。 将人乙醛脱氢酶2 基因（ ）克隆至原核表达载体pET32a 中，
aldh2
构建重组载体pET32a-ALDH2。将构建的重组载体转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3），用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）进行诱导，
SDS电泳结果显示目的蛋白得到大量表达；且对诱导表达条件进行优化。结果显示，在37℃，1.0 mmol/L IPTG 诱导表达6 h
为最优表达条件。由于目的蛋白几乎都是以包涵体形式表达，为了得到有活性的乙醛脱氢酶，对包涵体变性、复性和纯化进行了研究。
试验数据显示，酶的最终得率为14.49 U/L。并通过用Bradford 法，测定复性蛋白的浓度约为77 μg/mL，进行活性检测表明，该复
性蛋白具有乙醛脱氢酶活性，酶活性约为1.449 U/mL。通过构建重组载体pET32a-ALDH2 和优化表达条件， 在原核表达宿主
aldh2
E.coli BL21（DE3）得到大量表达 ；此外，利用透析复性法得到的复性蛋白酶活性有所提高。
关键词 ： 乙醛脱氢酶2 克隆 条件优化 酶活鉴定
DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2014.12.034
Expression and Activity Assay of Human Aldehyde Dehydrogenase2 in
Escherichia coli
Huang Juan Wang Hehua Zhang Xiaoji Pan Boyu Chen Xiaoping Wu Yuanxin
（School of Chemical Engineering and Pharmacy ，Wuhan Institute of Technology ，Key Laboratory for Green Chemical Process of Ministry of
Education ，Wuhan 430073 ）
Abstract: The commercial acetaldehyde dehydrogenase is mainly extracted from animal cell and hepatocellular mitochondria. Source
is limited and the cost is high. So the micobiological fermentation was used to
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