脑缺血后HIF-VEGF-Notch通路信号分子的变化及和缺血区血管新生的关系.pdf

摘要 摘要 研究背景和目的： 流行病学调查显示我国每年都有大量的脑血管病发生，在这些脑血管病中 以缺血性疾病为主。缺血导致大量脑神经元发生不可逆性的变性坏死，出现严 重的神经功能缺失。如能及早促进局部新生血管形成恢复血流再灌注，挽救半 影区濒临死亡的神经细胞，对于缺血性脑卒中的治疗具有重大意义。血管内皮 生长因子(VEGF)直接作用于内皮细胞参予新生血管形成，成为血管形成过程 中最重要的成血管生长因子。同时Notch信号途径通过局部细胞间的相互作用也 对血管的发育和形成构成重要影响。研究显示缺血缺氧损伤可以上调VEGF表 达，激活Notch信号通路，VEGF调控Notch信号途径而促进新生血管形成。 VEGF．Notch信号通路对血管的发育和形成起着非常重要的调控作用，但具体的 间复杂的关系。缺氧诱导因子I(HIF．1)是在肝细胞和转基因动物上进行促红细胞 生成素(EPO)基因表达研究时发现的一种转录因子。它能特异性感受机体缺氧 变化，对维持机体氧平衡起到重要作用。HIF．1通过对下游靶基因的调节作用参 予到缺氧后血管新生、细胞增殖凋亡、能量代谢等诸多病理生理过程中。缺血 信号通路成为缺血缺氧后血管新生的主要调节路径。本研究主要观察体内脑缺 的变化与缺血区血管新生的情况，探讨HIF．1．VEGF-Notch通路对促血管新生的 主要调控作用机制，为将来精确调控内源性的脑血管生成，实现中枢神经系统 损伤后的组织修复与功能重建提供理论依据，也为缺血性脑卒中治疗提供新思 路。 研究内容和方法： l、SD大鼠随机分正常组和缺血对照组，缺血对照组采用线栓法制作大脑 cerebral 中动脉栓塞(middle arteryocclusion，MCAO)脑缺血模型，于缺血再灌注后 8h、 1d、3d分批处死各组大鼠，取脑组织标本待检。 2、脑组织标本冰冻切片行免疫组织化学荧光染色检测缺血区HIF．1a表达， lI 摘要 血皮质区HIF．1a蛋白表达情况，ImageJ软件分析其相对表达强度。 3、脑组织标本冰冻切片行免疫组织化学荧光染色检测缺血区VEGFR2表 达，每张切片在x400高倍镜下计数5个不同视野的VEGFR2阳性细胞数量： 软件分析其相对表达强度情况； 5、脑组织标本冰冻切片行免疫组化荧光双染检测脑缺血区HeM和VIII因 新生情况。 6、探讨HIF．1-VEGF-Notch通路对脑血管生成的主要调控作用机制。 结果： 1、MCAO大鼠均出现程度不等的对侧肢体偏瘫、眼脸下垂、行走时原地转 圈和向对侧倾斜、提尾向对侧侧身等神经功能缺失表现；TTC染色可见右侧大 脑中动脉供血区呈苍白色而周围正常脑组织呈现红色；脑缺血损伤模型制作成 功。 0【 血皮质区HIF．1 比较，缺血3d后HIF．10t阳性细胞数量显著增加。westernblot检测缺血皮质区 和38士0．1 但3d较1d时有所下降。 与对照组0．40士O．55比较，缺血3d后VEGFR2表达显著增加。 4、SD大鼠皮质区notchl和hes．1表达：westernblot检测缺血皮质区notchl 蛋白表达较正常显著增加。 ⅡI 摘要 14．0-a：2．35。缺血8h组较对照组低，此后表达渐增加，缺血3d后内皮细胞数达 一峰值。 结论： 1、通过检测缺血脑皮质区HIF．1a的变化，结果提示缺血后HIF．1a的大量 表达，其通过调控相应的下游靶基因，启动了血管新生的主要过程，对缺血后 血管新生具有重要意义。 的促进了缺血区微血管形成，VEGF．Notch信号通路对缺血后的血管形成具有重 要调控作用。 3、通过检测缺血区hesl+VIII因子表达变化，结果表明缺血缺氧激活 加了血管内皮细胞的增殖，有效促使新生血管形成，使得HIF．1．VEGF-Notch信 号通路在缺血后血管新生的过程中成为主要的调控途径。 关键词：缺血性脑卒中：HIF一1一VEGF-Notch信号通路；血管内皮细胞增殖；血 管生成 新生中缺氧／HIF．VEGF-Notch通