紫茎泽兰DNA的提取及AFLP反应体系的建立.pdfVIP

武汉植物学研究 2006，24(6)：498～504 JournalofWuhanBotanicalResearch 紫茎泽兰 DNA的提取及 AFLP反应体系的建立 黄文坤 ’2，，郭建英 ’。，万方浩 ， ，高必达 ，谢丙炎4 (1．植物病虫害生物学国家重点实验室，中国农业科学院植物保护研究所，北京 100094； 2．农业部外来人侵生物预防与控制研究中心，北京 100081；3．湖南农业大学生物安全科学技术学院，长沙 410128； 4．中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081) 摘 要：以紫茎泽兰叶片为材料 ，用改进的CTAB法，在提取液中加入2％PVP40( y)、0．4％BME( y)，提取到 了高质量的基因组 DNA，0D26。／0D 在 1．7～1．9之间，蛋白质、多酚类、多糖、RNA等去除较彻底，适于AFLP分 析。通过对紫茎泽兰DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程中各关键因素的比较研究，建立了一套 优化的AFLP分子标记体系，得到了清晰的AFLP银染指纹图谱，实验结果重复性好。 关键词：紫茎泽兰；入侵植物；DNA提取；AFLP；指纹图谱 中图分类号：Q786；Q949．783．5 文献标识码：A 文章编号：1000-470X(2006)06-0498-07 GenomicDNA ExtractionM ethodandAFLPAmplificationReaction System ofAgeratinaadenophoraSpreng． HUANGWen—Kun · ，GUOJian—Ying ，WAN Fang．Hao” ，GAOBi．Da。，XIE Bing—Yna (1．StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests，InstituteofPalntProtection，ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Beijing 100094，China；2．CenterforManagementoflnvasiveAlienSpecies，MinistryofAgr／c~ure，P．R．China， Beijing 100081；3．CollegeofBio-SafetyScienceandTechnology，HunanAgriculturalUniversity，Changsha 410128，China； 4．InstituteofVegetablesandFlowers，hCineseAcademyofAgricultural ，Beijing 100081，China) Abstract：ThestudydealtwithextractionofDNAwithimprovedCTAB (cetyl—trimethyl-ammonium bro— mide、methodfrom Ageratina adenophora Spreng．ItshowedhtatCTAB buffersupplementedwiht 2％ PVP40 (polyvinylpyrrolidone40)nad0．4％ B—mercaptoehtnaalwassuitableforhtegenomicDNA ex— tractionofA．adenophora， thOD260／OD280valueof1．7一1．9，representinghigh purityofhteextracted DNA na dhte completeelimination ofprotein．phenol。polyhexosena dRNA．Thushte improved CTAB mehtod wasapprovedsuitableforfurtherAFLPna alysisofA．adenophora．SomekeyfactorsaffectingDNA exrtaction．restriction—ligasereaction。pre—amplificationandampli