鱼腥藻PCC7120藻蓝蛋白α亚基体内重组研究.pdfVIP

武汉植物学研究 2006，24(5)：387～391 Journalof WuhanBotanicalResearch 鱼腥藻 PCC7120藻蓝蛋 白 亚基体 内重组研究 陈 芳，周 明，赵 岩，滕 吟，朱菁萍，赵开弘 (华中科技大学环境科学与工程学院，武汉 430074) 摘 要：为了研究藻蓝蛋白仅亚基的生物合成途径，通过构建相容的3种重组质粒pETDuet—cpcA、pCOLADuet—cpcE— cpcF和pACYCDuet．hol-pcyA，将裂合酶基因cpcE和cpcF、血红素氧化酶基因，IDJ、藻蓝胆素合成酶基因pyA和脱辅 基藻蓝蛋白仅亚基基因cpcA共同转入大肠杆菌 BI21(DE3)。通过色素蛋白锌电泳和光谱检测表明产生了生物活 性的CpcA．PCB。成功实现了大肠杆菌内藻蓝蛋 白仅亚基 84位半胱氨酸残基与 PCB的连接。而在裂合酶基 因 cpcE和cpcF不转人大肠杆菌的情况下，大肠杆菌内只有0．2％的 CpcA—PCB产生。以上研究为进一步在大肠杆菌 内合成天然的藻蓝蛋 白奠定了基础。 关键词：藻蓝蛋 白；CpcA；cpcE；cpcF；体 内重组 中图分类号 ：Q784 文献标识码 ：A 文章编号：1000—470X(2006)05—0387—05 BiosynthesisofaFluorescentCyanobacterialC-phycocyanin Holo．仅SubunitinEscherichiacoli CHEN Fang，ZHOUMing，ZHAO Yan，TENG Yin，ZHUJing—Ping，ZHAO Kai—Hong’ (CollegeofEnvironmentalScienceandEngineering，Huazhong UniversityofSceinceandTechnology，Wuhan 430074，China) Abstract：Theentirepathwayforthesynthesisofafluorescentholophycobiliproteinsubunitfrom aphoto— synhteticcyanobacterium (Anabaenasp．PCC7120)wasreconstitutedinEscherichiacoli．Cyanobacterial genesofrenzymesholandpcyA wereexpressedfrom aplasmidpACYCDuet—hol-pcyA．Genesofrtheap— oprotein(c—phycocyaninOtsubunit；cpcA)wereexpressedonasecondplasmidpETDuet一 ．Genesf0r theheterodimericlyase(cpcEandcpcF)thatcatalyzeschromophoreatmchmentwereexpressedonathird plasmidpCOLADuet—cpcE—cpcF．Upon induction，recombinantE．coliused thecellularpoolofheme to produceholo—CpcA wiht spectroscopicpropertiesqualitativelyand quantitativelysimilarto htoseofhte sameproteinproducedendogenouslyincyanobacteria．About0．2％ oftheapo—CpcA wasconvertedtoho一 1o—CpcA—PCB inasimilarlyengineeredE．colisrtainhtatlackscpcE andcpcF． Keywords：C—phycocyanin；CpcA；印 ；cpcF；Reconstitution invivo 藻胆体 (phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中 成酶pcyA还原和异构化形成特定的藻胆色素 。 的一类捕光蛋 白复合物，它 由藻胆蛋 白和连接蛋 白