大学毕业设计芽孢杆菌产甘露聚糖酶酶活稳定性的提高论文.docVIP

目 录 摘 要 1 ABSTRACT 2 第一章 绪论 3 1.1β-甘露聚糖酶的研究现状 3 1.1.1β-甘露聚糖酶的来源 3 1.1.2β-甘露聚糖酶的性质 4 1.1.3β-甘露聚糖酶的诱导 4 1.2β-甘露聚糖酶的纯化 5 1.2.1 纯化的意义 5 1.2.2 分离纯化工艺 6 1.3β-甘露聚糖酶的稳定性及稳定化 7 1.4β-甘露聚糖酶的应用 8 1.4.1石油钻采 8 1.4.2饲料添加剂 8 1.4.3食品保健 8 1.4.4造纸工业 9 1.4.5纺织工业 9 1.4.6工具酶 9 1.5研究目的和研究内容 9 1.5.1研究目的 9 1.5.2研究内容 10 第二章 枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的产生及性质 10 2.1实验仪器与材料 10 2.1.1实验仪器与设备 10 2.1.2试剂 11 2.1.3菌种 11 2.1.4培养基 12 2.2实验方法 12 2.2.1粗酶液的制备 12 2.2.2酶活的测定 12 2.2.3温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 14 2.2.4不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 14 2.2.5反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 14 2.2.6激活剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 14 2.2.7防腐剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 15 2.2.8金属离子螯合剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 15 2.3实验结果与分析 15 2.3.1温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 15 2.3.2不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 16 2.3.3反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 17 2.3 反复冻融情况下酶的稳定性 17 2.3.4保护剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 17 2.3.5防腐剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 18 2.3.6金属离子螯合剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 18 结论 18 展望 19 参考文献 20 致谢 22 摘 要 β一甘露聚糖酶是一种重要的半纤维素酶，应用广泛，多采用微生物发酵制备。本文首先利用芽孢杆菌对发酵培养基进行培养，并通过分离纯化制得高纯酶进行运用。 对酶的稳定性进行研究，通过添加稳定化试剂，储存于不同的温度，将酶浓缩成不同的倍数，以及反复冻融来研究酶的稳定性。主要工作如下: 对芽孢杆菌发酵产生的酶液进行稳定性检测试验，确定了芽孢杆菌产甘露聚糖酶的在各种不同的条件下酶活的稳定性情况;优化了酶液在储存过程中的可能遇到的各种情况，大大降低了运输和储存成本，有利于产品的后续精制以及使用。 β一甘露聚糖酶粗酶液经盐析、超滤、离子交换层析、凝胶层析及超速离心即可制得纯酶液。 利用酶活随温度和反复冻融、不同浓缩倍数以及各种添加剂的变化而变化的规律，初步探讨了各种外界因素对酶活力的影响。 考察了七种添加剂(葡萄糖、海藻酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、明胶、EDTA、乙醇)在不同浓度下对制备的β一甘露聚糖酶稳定性的影响，结果表明:添加葡萄糖可大幅提高酶的热稳定性，4℃时甘露聚糖酶的稳定性较高。 确定了浓缩酶的稳定性，以及反复冻融对芽孢杆菌产甘露聚糖酶的稳定性的影响。 关键词：芽孢杆菌 甘露聚糖酶 浓缩 温度 反复冻融 添加剂 稳定性 ABSTRACT β-mannanase is an important hemicellulase, widely used, the use of microbial fermentation preparation. The first use of Bacillus culture fermentation medium, and separation and purification system, high purity enzyme use. To study the stability of the enzyme by adding stable reagent, stored at different temperatures, the enzyme is concentrated into a different multiples, as well as repeated freezing and thawing to study the stability of the enzyme. The main work is as follows: Enzyme produced by Bacillus stability testing to determine the stability of the situation Bacillus mannana