细胞生物学第十细胞增殖与调控.pptVIP

* * 细胞增殖是生命的基本特征，种族的繁衍、个体的发育、机体的修复等都离不开细胞增殖。一个受精卵发育为初生婴儿，细胞数目增至1012个，长至成年有1014个，而成人体内每秒钟仍有数百万新细胞产生，以补偿血细胞、小肠粘膜细胞和上皮细胞的衰老和死亡。 细胞增殖是通过细胞周期（cell cycle）来实现的，而细胞周期的有序运行是通过相关基因的严格监视和调控来保证的。 第十章 细胞增殖与调控 细胞无限制增长对个体来说意味着癌症; 个体无限制繁殖对地球来说意味着灾难。 第一节 细胞周期与细胞分裂 一、细胞周期 概述：细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程（也称细胞生活周期，或细胞繁殖周期），可分为四个阶段： ①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到DNA复制之前的间隙时间； ②S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期，只有在这一时期H3-TDR才能掺入新合成的DNA中； ③G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间； ④M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。 G0期：细胞暂时离开细胞周期，停止分裂，去执行一定的功能，称静止期细胞， G0期多发生在G1期。 G0期一旦得到信号，会迅速返回细胞周期（如结缔组织中的成纤维细胞等）。 细胞周期 细胞周期分为4个阶段 从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：①连续分裂细胞，连续进行细胞周期运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 ②休眠细胞，暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝细胞等。 ③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。 周期中的主要事件 G1期：合成蛋白、糖类、脂类等，但不合成DNA，是细胞的最初生长期。决定G1期向S期转换的特定时期称起始点（或限制点，或检验点），受内外多种因素的控制。 S期：DNA和组蛋白合成，两者立即结合形成核小体。 G2期：合成大量蛋白质，能否进入M期，受G2期检验点的控制。 M期：细胞分裂 Experimental demonstration of the coordinated Synthesis of DNA and hitones. 细胞周期长短测定： 细胞周期的时间长短与细胞类型有关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时，人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人成纤维细胞18小时，CHO细胞14小时，HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因。 细胞周期各阶段的时间(细胞周期测定) TG2－G2期时间， TS－S期时间， TC－细胞， TM－M期时间：（M/总）X 周期时间，TG1＝ TC －（TG2 ＋ TM ＋ TS ） 脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法 H3-TdR标记，洗涤，培养，定时取样，放射自显影分析 BrdU标记，抗体染色观察 流式细胞仪检测细胞周期 流式细胞分选仪检测法 根据DNA含量分类细胞，根据类群细胞的数量推断时间。 细胞周期的时间 细胞同步化： 细胞同步化(synchronization)是指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化，前者称自然同步化，后者称为人工同步化。 1、自然同步化 多核体：如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108，体积达6~9cm。 某些水生动物的受精卵：如海胆卵可以同时授精，最初的3次细胞分裂是同步的，再如大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。 增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。 2、人工同步化 选择同步化： 有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%～2%） 细胞沉降分离法：不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度较低。 诱导同步化 DNA