第三章核酸化学forgraduatescandidates要点.ppt

* * * 影响Tm值的因素有（ ）。 A. 一定条件下核酸分子越长，Tm值越大 B. DNA中G，C对含量高，则Tm值高 C. 溶液离子强度高，则Tm值高 D. DNA中A，T含量高，则Tm值高 双链DNA解链温度增加，提示其中含量高的是（ ）。?A. A和G B.C和T C.A和T D.C和G 2. 核酸的复性 变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的单链重新缔合成双链 热变性DNA骤然冷却（淬火）不能复性 将变性DNA缓慢冷却（退火）可以复性 减色效应（低色效应） ——复性时紫外吸收减少 分子量：越大，复性越难 浓度：越大，复性越容易 本身组成和结构：具多重复序列DNA复性快 影响复性程度与速率的因素 哪种情况下互补的DNA两条单链会复性？( ) A.速冷 B.加热 C.慢冷 D.加解链酶 E.加聚合酶和ATP DNA变性时( )断裂，变性后紫外吸收会( )。 A.离子键，降低 ?? B.离子键，增强 ?? C.分子键，降低 ?? D.氢键，增强 DNA变性是指（ ）。 A．分子中磷酸二酯键断裂 B．多核苷酸链解聚 C．DNA分子由超螺旋→双链双螺旋 D．互补碱基之间氢键断裂 E．DNA分子中碱基丢失 热变性DNA在适当条件下可复性，条件之一是（ ）。?A.骤然冷却 B.缓慢冷却 C.浓缩 D.加入浓的无机盐 简述核酸的变性与复性。 室温下DNA溶液具有很高的粘度。加热到80℃以上， 将破坏DNA的氢键和碱基堆积力: 既破坏了DNA的双螺旋构象 又将其互补双链解为单链，并导致粘度急剧下降 ——DNA的变性过程，伴之呈现增色效应。 变性不涉及DNA共价键结构的破坏 缓慢降低温度，恢复生理条件，DNA又会自发互补结合， 重新形成原来的双螺旋结构，称为复性。 若变性不彻底，两股链未完全分开，复性过程很快 DNA片段越大复性越慢 变性DNA的浓度越大越容易进行复性 ——伴随复性，DNA呈现减色效应。 DNA Tm值较高是由于哪组核苷酸含量较高所致？ A．G+A B．C+G C．A+T D．C+T E．A+C DNA变性后，下列那一项变化是正确的? A.对260nm紫外吸收减少 B.溶液粘度下降 C.磷酸二酯键断裂 D.核苷键断裂 E.嘌吟环破裂 DNA复性的重要标志是( )。 A.溶解度降低 B.溶液粘度降低 C.紫外吸收增大 D.紫外吸收降低 下列各DNA分子中，碱基组成比例各不相同，其中那种DNA的Tm最低（ ）。 A. A-T占15% B. G-C占25% C. G-C占40% D. A-T占80% E. G-C占35% 由结核分枝杆菌提纯出含有15.1％（按摩尔计算）的腺嘌呤的DNA样品，计算其它碱基的百分含量。 A=T=15.1% ； G=C=34.9% 下列三种DNA中，哪个的Tm值最高？哪个的Tm值最低？为什么？ A. AAGTTCTCTGAATTA TTCAAGAGACTTAAT B. AGTCGTCAATGCATT TCAGCAGTTACGTAA C. GGATCTCCAAGTCAT CCTAGAGGTTCAGTA 将下列DNA分子加热变性，再在各自的最适温度下复性，哪种DNA复性形成原来结构的可能性更大？为什么？ A.ATATATATAT B. TAGACGATGC TATATATATA ATCTGCTACG 不同来源的DNA经热变性后缓慢冷却 异源DNA间如存在互补序列 复性时会交错配对形成杂交DNA分子 3. 核酸的杂交 Southern杂交（DNA） Northern杂交（RNA） Western杂交 ( Pr ) 在适宜条件下，核酸分子两条链通过杂交作用可自行形成双螺旋，取决于（ ）。?A.DNA的Tm值 B.序列的重复程度 ?C.核酸链的长短 D.碱基序列的互补 四、核酸的分离纯化 1.核酸的超速离心 利用核酸MW、密度和构象的差异进行分离 蔗糖/甘油/浮力密度梯度离心 2.核酸的凝胶电泳 琼脂糖、PAGE （聚丙烯酰胺凝胶电泳） 不同构象的DNA分子迁移率不同 超螺旋＞线状分子＞开环状分子 溴化乙锭、硝酸银 3.核酸的柱层析 羟基磷灰石柱层