Rac1和神经前体细胞增殖分化关系研析.pdfVIP

Racl与神经前体细胞增殖分化关系的研究 中文摘要 Racl与神经前体细胞增殖分化关系的研究 摘 要 目的探讨R盈c1与神经前体细胞增殖分化的关系，对于揭示神经干／前体细胞增 殖分化的分子机制，具有重要的理论意义；为有效利用神经前体细胞治疗神经性疾病 或促进神经损伤后修复提供理论依据。 方法本实验从三个方面来研究R丑C1与神经前体细胞增殖分化的关系：(1)取新 生SD大鼠大脑皮层，原代培养获得混合胶质细胞培养体系，在10％血清的培养基中 培养6d，细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点，即无血 d、2d、4d、10 清培养O d，用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化，免疫荧光 染色技术鉴定细胞种类以及I沁1蛋白在细胞内的表达，通过W色stemblot检测I沁1 新生SD大鼠大脑皮层原代混合胶质细胞培养6d时，采用体外划伤方式造成一个约 1n皿的细胞损伤，更换无血清培养基培养。O．2A前体细胞迁移到损伤区域，对迁移 l沁1的表达。(3)取新生大鼠大脑皮层，混合胶质细胞培养7．9天，采用恒温震荡差 体细胞分化过程中I沁1、Cdc42及活性蛋白的表达变化。 结果(1)建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合胶质细胞培养体系，此体系底层 主要是由I型星形胶质细胞组成的单层细胞，GFAP染色呈阳性；在单层细胞上面有 一些小圆形强折光性神经前体细胞生长，B．Ⅲ．Tubulill染色呈阳性。更换无血清培养 d-4 基培养0 d期间上层神经前体细胞大量增殖，无血清培养4d后，神经前体细胞向 blot定量结果分析显示， 神经元方向分化，p一Ⅲ．Tubulm、R盘c1染色呈阳性。W色stem 无血清培养4d时神经前体细胞的胝1蛋白表达水平明显高于无血清培养0d时的表 达水平，随后神经前体细胞向神经元方向分化，无血清培养10d后神经前体细胞‰1 表达水平明显低于无血清培养4 Racl与神经前体细胞增殖分化关系的研究 中文摘要 d、10 果分析显示无血清培养4 d时Ikl活性蛋白表达水平高于无血清培养0d的表 达水平，即Racl活性蛋白在神经前体细胞增殖分化过程的表达呈现上升趋势。此外， Cdc42蛋白在神经前体细胞增殖过程中表达无变化，而分化过程中表达下降；Cdc42 活性蛋白表达呈现上升趋势。(2)建立了体外新生SD大鼠大脑皮层混合胶质细胞损 伤模型，细胞损伤后换无血清培养，O．2A前体细胞迁移到损伤区域，分化为2型星 形胶质细胞并修复损伤区域。免疫荧光染色发现Racl蛋白在O-2A前体细胞迁移分 化过程中始终表达。(3)成功分离纯化出O．2A前体细胞，细胞呈椭圆形，有典型的 双极突起，A285免疫荧光染色呈阳性；在有血清和无血清培养基中分别分化为2型 星形胶质细胞和少突胶质细胞。分化过程中‰1、Cdc42蛋白的表达下降，而‰1、 的‰1蛋白表达水平明显高于分化成熟的2型星形胶质细胞和少突胶质细胞的表达 熟的2型星形胶质细胞和少突胶质细胞的Ikl蛋白表达水平明显高于未分化的O．2A 前体细胞的表达水平。另外，在o．2A前体细胞分化过程中Cdc42蛋白的表达下降， 活性蛋白表达上升，与I沁1的变化一致。 结论I瀛1与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关，在神经前体细胞增殖过程 中Racl蛋白表达上升，而分化过程中I沁1蛋白表达下降。lkl活性蛋白表达促进 了神经前体细胞的增殖以及分化。 关键词I瀛1：神经前体细胞；O．2A前体细胞；细胞增殖；细胞分化 作 者：宋雪慧 指导老师：张焕相教授 Ⅱ Racl与神经前体细胞增殖分化关系的研究 英文摘要 R