平面色谱法(级药学).ppt

　平面色谱法 (plane chromatography) 主讲：袁玉 中南大学药学院 2012年5月 本章内容 第一节 平面色谱法的分类和原理 第二节 薄层色谱法 第三节 纸色谱法 第一节　平面色谱法的分类和原理 一、平面色谱法的分类 组分在以平面为载体的固定相和流动相之间吸附或分配平衡而进行的一种色谱方法。 　 二 平面色谱法参数 定性参数：反映组分的保留行为 相平衡参数：描述分离过程 面效参数：衡量分离效能 分离参数：衡量分离条件的优劣 （一） 定性参数 1 比移值(Retardation factor, Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比。 Rf =L/L0 （适宜范围0.2~0.8，最佳0.3~0.5） L——原点至斑点中心的距离 L0——原点至溶剂前沿的距离 1 比移值(Retardation factor, Rf值) ① Rf数值与组分及色谱条件（薄层板活性，展开剂等）和温度有关 ② 实验中满足下列条件，可获得真实Rf值： a 展开槽密闭不泄露，薄层板周围空间被展开剂蒸汽所饱和，无边缘效应; b 沿分离轨迹固定相与流动相无梯度变化; c 展开剂的前沿位置能正确测定。 2 相对比移值(relative Rf；Rr) Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s) 与组分、色谱条件、参考物质有关。 Rr值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系统误差（参考物质与组分在完全相同的条件下展开） (二)相平衡参数 1 分配系数 K = 2 保留因子 k = = 3 分配系数K、保留因子 k与Rf值的关系： 　　　　　 （三）面效参数 1 理论塔板数（n） n = 16(L/ W)2 2 塔板高度（H） H = L0/n （四）分离参数 1 分离度（R）R1 2 分离数（SN） R=1.177时， SN =L0 / ( b 0 + b 1) - 1, 第二节　薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) 一 定义、特点、主要类型 二 吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 三 薄层色谱操作方法 四 定性和定量分析 五 高效薄层色谱法 六 薄层扫描法简介 七 在药物研究中的应用 薄层色谱法特点： 1 分析速度快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 2 试样预处理简单，对试样限制少。 3 载样量比较大，适用于制备。 4 仪器简单，操作方便。 5 分离能力较强，分析结果直观。 薄层色谱法的主要类型 1 吸附薄层色谱法 原理 ：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。 吸附系数 Ka 大小不同实现分离 极性强的组分 Ka 大，Rf值小； 极性弱的组分 Ka 小，Rf值大。　　 2 分配薄层色谱法 原理：多次分配的过程，分配系数（溶解度）大小不同实现分离 分类：按流动相与固定相极性大小 薄层色谱法的主要类型 3 凝胶薄层色谱法： 用葡聚糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等铺成薄层板进行大分子化合物的分离。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，是利用其网孔大小把分子大小和形状不同的大分子化合物分开（一般是分开成组，而不能分开为单一化合物），又称为排阻或分子筛层析法。 4 胶束薄层色谱法(micellar TLC)： 用低浓度表面活性剂的水溶液为流动相，当所用的表面活性剂水溶液需超过某一浓度（临界胶束浓度CMC）时多余的表面活性剂不再溶解，而聚集成胶束（胶粒），因流动相为胶体分散体系，故称为胶束液相色谱。 二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 （一）吸附剂 1 硅胶：多孔性无定形粉末，表面带有硅醇基 （≡Si-OH），呈弱酸性,表面pH≈5。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键 （吸附性）。组分与硅醇基形成氢键 （被吸附）的能力不同而分离。 　　 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、 醛类等。 碱性物质与硅胶作用，展开时被吸附、 拖尾、甚至展不开。 硅胶 活度与含水量的关系：含水量高