生物组织中可溶性还原糖脂肪蛋白质的鉴定2.docVIP

生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 【实验指导】 一、实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖）与斐林试剂发生作用，可以生成砖红色沉淀。斐林试剂实际是Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，Cu2+则被还原成砖红色的Cu2O沉淀。反应式为： CH2OH—（CHOH）4—CHO+2Cu(OH)2→CH2—OH—（CHOH）4—COOH+Cu2O↓+2H2O 脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。苏丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大，当用苏丹Ⅲ的酒精溶液处理含有脂肪的生物组织时，酒精中的苏丹Ⅲ进入脂肪中，将脂肪染成橘黄色。 蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 二、目的要求 初步学会鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 三、材料用具 1．实验材料 （1）做可溶性还原糖的鉴定实验，应该选择含糖量较高、颜色为白色或近于白色的植物组织，以苹果、梨为最好。 （2）做脂肪的鉴定实验，应该选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前需浸泡3～4 h。 （3）做蛋白质的鉴定实验，可用浸泡1～2 d的黄豆种子（或用豆浆），或用鸡蛋蛋白。 2．仪器和试剂 （1）仪器：剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，研钵，石英砂，纱布，载玻片，盖玻片，毛笔吸水纸，显微镜。 （2）试剂：斐林试剂（主要由质量浓度为0．1 g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0．05 g/mL的CuSO4溶液配制而成），苏丹Ⅲ或苏丹IV染液，双缩脲试剂，体积分数为50%的酒精溶液，蒸馏水。 ?四、实验的方法、步骤 1．可溶性还原糖的鉴定 制备生物组织样液取样注入试剂加热和观察 2．脂肪的鉴定 制备生物组织实验材料染色去浮色制作临时装片→放在显微镜下观察（先低倍镜后高倍镜） 3．蛋白质的鉴定 制备生物组织样液注入组织样液注入试剂A注入试剂B观察颜色变化 ?五、实验成功的关键及注意事项 1．实验成功的关键在于实验材料的选择 （1）可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，或近于白色的。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 （2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功。 （3）蛋白质的鉴定实验，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。 2．注意事项 （1）斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1 g/mL的NaOH溶液)和乙液(0．05 g/mL的CuSO４溶液)分别配制、储存，使用时再临时配制，将4～5滴乙液滴入2 mL甲液中，配完后立即使用。 （2）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A(0.1 g/mL的NaOH溶液)，造成碱性的反应环境，再加试剂B(0.01 g/mL的CuSO４溶液)。 （3）在鉴定可溶性糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。 （4）在蛋白质的鉴定实验中，若用鸡蛋清作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。 （5）在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，染色时间不宜过长。 ?【基础训练】 一、选择题 1．可用于鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂是 A．斐林试剂 B．C．D．A 2．对斐林试剂和双缩脲试剂的配方，叙述不正确的是 A．都含有NaOH溶液和CuSO４溶液 B．斐林试剂的配制是将4～5滴0.05 g/mL的CuSO４溶液滴入2 mL 0.1 g/mL的NaOH溶液中即成 C．双缩脲试剂是将3～4滴0.01 g/mL的CuSO４溶液滴入2 mL 0.1 g/mL的NaOH溶液中混合而成的 D．双缩脲试剂含有两种试剂：质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01 g/mL的CuSO４溶液 解析：斐林试剂和双缩脲试剂的化学成分相同，但配制时使用的剂量和浓度及加入试剂的顺序不同。斐林试剂的配制是将4～5滴0.05 g/mL的CuSO4溶液滴入2 mL0.1 g/mL的NaOH溶液中即成，必须现用现配。双缩脲试剂是用质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01 g/mL的CuSO4溶液配制而成的，使用时先向待检样品中加入2 mL0.1 g/mL的NaOH溶液，振荡摇匀，