白花丹参hds基因的全长克隆及原核表达分析.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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白花丹参hds基因的全长克隆及原核表达分析.pdf

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1614 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 ( 11): 16 14 1620 花丹参HDS 基因的全长克隆与原核表达分析 1, 2 2 2 1, 2 1* 2* 丹 , 荣齐仙 , 袁庆军 , 张文婧 , 张永清 , 黄璐琦 (1. 山东中医药大学药学院, 山东济南 250355; 2. 道地药材国家重点实验室培育基地, 中国中医科学院中药资源中心, 北京 100700) 摘要: 根据丹参转录组数据库提供的基因片段设计特异性引物, 采用逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 方法, 从白花丹参中克隆 1-羟基-2- 甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合酶基因的全长 cDNA 序列, 命名为SmHDS , GenBank 注册号KJ746807 。序列长度为2 529 bp, 含有2 229 bp 的开放阅读框, 测编码742 个氨基酸, 含有 170 bp 的 5 UTR 和 130 bp 的3 UTR 。利用生物信息学软件对获得的序列进行同源性分析, 得出SmHDS 与紫花丹参HDS 的亲缘关系较近。原核表达分析结果表明SmHDS 在大肠杆菌中表达出与预测蛋白大小相当的目标蛋白, 同时对影响蛋白表达的4 个因素, 即诱导温度、诱导时间、IPTG 浓度和诱导时宿主菌的密度 (A 600) 进行了优化, 得出 SmHDS 蛋白表达的最佳条件为: 温度30 ℃、诱导时间20 h 、IPTG 终浓度0.2 mmol ·L 1、宿主菌的密度 (A 600) 值为 0.6 。这为进一步研究 1-羟基-2- 甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合酶在丹参酮类化合物生物合成途径中的作用提供了理论依据。关键词: 白花丹参; HDS ; 全长克隆; 原核表达中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 14) 11-16 14-07 Cloning and prokaryotic expression analysis of HDS from Salvia miltiorrhiza bge.f.alba. 1, 2 2 2 1, 2 JIANG Dan , RONG Qi-xian , YUAN Qing-j un , ZHANG Wen-jing , ZHANG Yong-qing1*, HUANG Lu-qi2* (1. College of Pharmacy, Shangdong University of Traditional Chinese Medicin