基于寒热性对照抗原的斑点免疫印迹法中药药性研究.pdfVIP

第 34 卷第 4 期 Vol.34 ，Issue 4 2009 年 2 月 February ，2009 基于寒/热性对照抗原的斑点免疫印迹法 中药药性研究 * * 王厚伟 ，窦彦玲，田景振，李 峰，王世军，王振国 （山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355 ） [摘要] 目的：从免疫原性上探讨中药药性的物质基础。方法：以高良姜、肉桂与仙茅 3 味典型热性中药水提物的混合 品作为热性对照抗原，以黄连、大黄与知母3 味典型寒性中药水提物的混合品作为寒性对照抗原，免疫家兔后，制备相应多 克隆抗体，分别应用寒、热性对照抗原抗体与 9 味中药水提物作斑点免疫印迹，杂交信号应用 Quantity One 定量扫描分析。 结果：9 味中药与热性对照抗原多克隆抗体的印迹信号大小顺序为：干姜、附子、杜仲、秦皮、金银花、知母、黄连、大黄、 黄柏；与热性对照抗原多克隆抗体的印迹信号相似度分别为：57.33 %，43.56 % ，34.16 %，30.2 %，28.81 %，26.53 % ，21.68 %，17.62 %，14.85 %；9 味中药与寒性对照抗原多克隆抗体的印迹信号大小顺序为：大黄、知母、黄连、黄柏、干姜、金 银花、秦皮、杜仲、附子；与寒性对照抗原多克隆抗体的印迹信号相似度分别为：55.22 %，54.23 %，46.72 % ，34.08 %， 30.3 %，24.48 % ，24.33 % ，20.35 % ，15.17 %。以印迹信号相似度为聚类变量，经Wistar’s Method 聚类分析，9 味中药被 聚为 2 大类，一大类为：黄柏、知母、黄连、大黄，该大类与寒性对照抗原距离小，与寒性对照抗原的距离依次增大；另一 大类为：干姜、附子、杜仲、秦皮、金银花，该大类与热性对照抗原距离小，与热性对照抗原的距离依次增大。结论：总体 上，测试中药与对照抗原抗体的印迹信号相似度越小，其药性与对照抗原的距离越大；斑点免疫印迹法是中药药性物质基础 研究的一种实用、有效的新方法。 [关键词] 寒/热性中药；多克隆抗体；斑点免疫印迹 中药功效是其本质属性的客观表现，药性是其 性的物质基础。以 3 味经典热性中药：高良姜、肉 本质属性的主观反映，成分是构成药效的物质基 桂与仙茅的水提物为热性对照抗原，以 3 味经典寒 础。构成中药四性理论的 3 个核心元素是功效、物 性中药：黄连、大黄与知母的水提物为寒性对照抗 质、药性。就中药四性成分要素表征体系的研究而 原，应用斑点免疫印迹法对 9 味中药（大黄、知母、 言，主要的研究目标是探求构成中药的初生物质、 黄连、干姜、黄柏、金银花、秦皮、杜仲、附子） 次生物质、无机成分与寒、热药性间的关系及其规 药性中具有免疫原性的物质基础做了比较研究。 律性。然而，相同药性的中药之间是否存在相近的 1 材料 物质构成呢？该问题的回答对于中药药性物质基 1.1 动物 新西兰大耳白兔，体重 2.0 kg ，雄性， 础的研究具有方向性的指导意义。 由 山东大学 动物中心提供， 动物合格证号 中药的不同化学组成和空间结构的抗原物质 SCXK(鲁)200301004 ，饲养环境温度25 ℃。 在免疫动物体内可以产生针对不同特异抗原的多 1.2 药材 高良姜Alpinia officinarum Hance ，肉桂 克隆抗体，基于这些多克隆抗体的免疫识别作用， Cinnamomum cassia Pre