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1200 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 (8): 1200 1207
LEDGF/p75 白的可溶性表达、纯化及功能研究
1† 2† 1*
张大为 , 何红秋 , 郭顺星
(1. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193;
2. 重庆市科学技术学院重庆生物医药与器械研究中心, 重庆 401123)
摘要: HIV-1 整合酶 (integrase, IN) 是病毒复制过程中的一个关键酶, 其与宿主晶状体上皮源性生长因子p75
(lens epithelium-derived growth factor p75, LEDGF/p75) 的蛋白 蛋白相互作用是筛选抗病毒药物的一个重要靶
点。为开展以 IN-LEDGF/p75 相互作用为靶点的抑制剂研究, 本研究构建了 LEDGF/p75 蛋白重组质粒, 在原核
细胞中进行了可溶性表达和功能研究。根据大肠杆菌密码子偏爱性, 全合成高利用率密码子的LED GF/p 75 基因
序列, 并克隆到表达载体pGEX-4T-1 中构建重组质粒。在大肠杆菌中优化表达LEDGF/p75 蛋白, 经SDS
鉴定和亲和色谱纯化蛋白, 采用酶联免疫吸附实验方法 (ELISA) 测定了 LEDGF/p75 蛋白的生物学活性。结果
显示, 构建的重组质粒获得高效稳定的可溶性表达, ELISA 证实体外表达的LEDGF/p75 蛋白能够与HIV- 1 IN 相
互作用, 并促进IN 链转移反应的完成。本研究为建立以LEDGF/p75-IN 相互作用为靶点的抗HIV 药物筛选平台
打下了基础。
关键词: LEDGF/p75; 基因表达; HIV-1 整合酶; ELISA
中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 14) 08- 1200-08
Prokaryotic soluble expression, purification and
function study of LEDGF/p75 protein
ZHANG Da-wei1†, HE Hong-qiu2†, GUO Shun-xing1*
(1. Institute of Me dicinal Plant Development, Chinese Ac ademy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,
Beijing 100193, China; 2. Chongqing Centerfo r Biomedicines and Medical Equipme nt, Chongqing Ac ademy of Science
and Technology, Chongqing 401123, China )
Abstract : HIV-1 integrase (IN) is a key enzyme for the viral replication. The pro
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