百日咳杆菌效应cpg-odns调控变应性哮喘toll信号分子的实验的研究.pdfVIP

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 11, 46 (3) : 285292 ·285 · 百日咳杆菌效应CpG-ODNs 调控变应性哮喘Toll 信号分子的实验研究 张宝袁, 迟 深, 孙 云* (扬州大学医学院药理学教研室, 江苏 扬州 225001) 摘要: 从百日咳杆菌中分离出非甲基化寡核苷酸单链 (CpG-ODNs), 建立卵白蛋白 (OVA) 致敏的小鼠急性 哮喘与慢性哮喘模型, 经急性哮喘模型从百日咳杆菌CpG-ODNs 与9 条相似度高且含有CG 片段的seq A～seq I 序列中筛选出有效序列 (seq A), 以seq A 腹腔注射 (ip) 及灌胃 (ig) 对急、慢性哮喘小鼠分别进行干预。检测 支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中白细 (WBC) 总数和嗜酸性粒细 (EOS) 数, 酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测 BALF 中细 因子及血管内皮生长因子 (VEGF) 水平。逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 检测小鼠脾细 TLR-9 mRNA 表达量; 蛋白印迹 (Western blotting) 法检测小鼠肺组织TLR-9 蛋白表达。结果表明, 小鼠急性哮 喘模型经腹腔注射及灌胃seq A 预处理, 可明显抑制BALF 中WBC 总数增加, 显著抑制EOS 增加; 百日咳杆菌、 CpG+及seq A～seq D 灌胃组亦显著抑制EOS 增加, 而seq E ～seq I 作用不明显; 上述各序列干预组以腹腔注射 途径抑制EOS 作用较为显著。对小鼠慢性哮喘模型, CpG+和seq A 腹腔注射预处理均能明显上调BALF 中 干 扰素 (IFN- ) 空白对照组: ( 176.45 23.46) pg∙mL−1; ② 模型组: ( 174.11 22.71) pg∙mL−1; ③ CpG+ (ip) : (220.56 15.42) pg∙mL−1; ④seq A (ip) : (225.23 21.60) pg∙mL−1; 并下调白介素-4 (IL-4) 空白对照组: (66.9 1 5.81) pg∙mL−1; ② 模型组: (81.02 11.24) pg∙mL−1; ③ CpG+ (ip) : (63.99 6.09) pg∙mL−1; ④ seq A (ip) : (62.75 10.03) pg∙mL−1; 各序列组对VEGF 无显著影响 (P 0.05); seq A 腹腔注射亦能上调小鼠脾细 TLR-9 mRNA (TLR-9/GAPDH) 空白对照组: 0.62 0.13; ② 模型组: 0.66 0.17; ③CpG+ (ip): 1.46 0.26; ④seq A (ip): 1.42 0.34 及肺组织TLR-9 蛋白表达 (TLR-9/β -actin) 空白对照组: 0.63 0.16; ② 模型组: 0.6 1 0.07; ③CpG+ (ip) : 1.15 0.25; ④seq A (ip) : 1.03 0.29; 但经灌胃途径无明显影响。结果显示, CpG-ODNs 和获得的CpG 序列seq A 可显著抑制哮喘模型的气道炎症反应以及相应炎症细 因子水平的改变, 其作用机制可能与调节Th1/Th2 平衡、 调控Toll 样受体9 (TLR-9) 表达有关。 关键词: 哮喘; 百日咳杆菌; 寡核苷酸单链; Th1/Th2; TLR-9 中图分类号: R963