及cypor共表达cyp2d61和cyp2d610及代谢活性比较.pdfVIP

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 11, 46 (2) : 2072 12 ·207 · CYPOR 共表达CYP2D6*1 和CYP2D6*10 及其代谢活性比较 1, 2 1 1 1 1 1* 钱鸣蓉 , 陈 静 , 刘 瑶 , 余露山 , 陈枢青 , 曾 苏 ( 1. 浙江大学 学院, 浙江 杭州 310058; 2. 浙江省农业科学院农产品质量标准研究所, 浙江 杭州 310021) 摘要: 细胞色素P450 2D6 (cytochrome P450 2D6, CYP2D6) 是一种重要的氧化代谢酶, 呈基因多态性, 对 物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异, CYP2D6*10 在中国人群中的发生率高达 51.3% 。采用杆状病毒昆虫 表达系统, 采用与细胞色素氧化还原酶 (cytochrome oxidoreductase, CYPOR) 共表达的方式获得具有代谢活 性的CYP2D6*1/CYP2D6*10, 并初步研究其催化右美沙 的代谢活性差异。构建重组质粒pFastBac-CYP2D6*1, pFastBac-CYP2D6*10 和 pFastBac-CYPOR, 并分别转化 DH 10Bac 菌株构建重组 Bacmid-CYPOR, Bacmid- CYP2D6*1 和Bacmid-CYP2D6*10, 转染Sf9 昆虫细胞, 获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染Sf9 昆虫细胞。 通过测定混悬蛋白催化右美沙 的速率来优化重组 CYPOR 和 CYP2D6 病毒感染 Sf9 昆虫细胞的感染复数 (multiplicity of infection, MOI) 值和其比例, 获得活力较高的重组CYP2D6*1 和CYP2D6*10 。重组CYP2D6*1 催化右美沙 的K 为 (26.67 2.71) µmol·L−1 (n = 3), V 为 (666.7 56.78) pmol·nmol−1(CYP2D6)·min−1 (n = 3), 清 m max −1 −1 除率为25.0; CYP2D6*10 催化右美沙 的K 为 ( 111.36 10.89) µmol·L (n = 3), V 为 (222.2 20.12) pmol·nmol m max −1 (CYP2D6)·min (n = 3), 清除率为2.0。利用杆状病毒昆虫细胞系统表达的重组CYP2D6*1 和CYP2D6*10 代谢 物具有活性差异, 可用于体外研究其催化某些 物的代谢差异, 这有助于理解 物代谢的个体差异、预测药物之 间的相互作用。 关键词: 昆虫表达系统; 细胞色素P450 2D6*1; 细胞色素P450 2D6*10; 细胞色素氧化还原酶; 代谢差异 中图分类号: R969 文献标