滤器和超滤管详解.pptVIP

如何界定超滤管失效 在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低（包括目的蛋白），而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的超滤管。 滤器和超滤管 赵慧彬 2015年6月3日 针头式过滤器采用透明级高分子材料丙烯腈－丁二烯－苯乙烯（ABS）或聚丙烯（PP）制成，与一次性注射器配套使用，为实验室常规使用的快速、方便、可靠的小体积样品的过滤处理装置， 主要应用： 样品的预滤， 实验室生物流体（血液、尿液等）、培养基和媒介添加剂的除菌过滤 2种直径规格可选：13和30cm 5种膜类型：MCE、NYLON?、PVDF、PES?、PTFE? 混纤膜（MCE）??????由硝酸纤维素和醋酸纤维素混合而成,亲水性,?化学兼容性强，蛋白吸附量高。用于颗粒分析，颗粒去处，生化分析，HPLC样品制备和溶剂过滤 尼龙膜（NYLON）??????化学相容性好，能在PH值1~12的条件下使用，适用于生物制品、培养基、溶液的除菌过滤。 聚偏氟乙烯膜（PVDF）??????亲水性PVDF膜结合的蛋白远远少于硝酸纤维素,尼龙和PTFE过滤膜，可与水溶液和多种有机溶剂兼容，适用性广泛，耐氧化性和耐热性好，极适用于HPLC、GC的制备。 聚醚砜膜（PES）??????低蛋白吸附，高流速，PH值范围广，化学相容性好，适用于样品的制备?、水溶剂过滤?、微生物研究?、环境分析?、?生物分析?、HPLC?流动相过滤等。 聚四氟乙烯（PTFE）??????化学稳定性和惰性，适用于化学腐蚀性较强的有机溶剂、水溶液和气体，对大多的酸性、碱性和溶液都有耐受性 黄色的是PVDF?Durapore 膜的，是又一款hero产品，其亲水型PVDF膜是所有膜中蛋白吸附最低的，如果是含有蛋白成分的样品，用黄色的Millex ，样品活性成分损失最小！ 绿色的是PES膜的，Millipore?Express ?PLUS商品名代表的是“最快流速”，这个得益于密理博对PES膜的特别工艺改造，漏斗形的膜孔结构带来业界标杆性的使用效果——既快又好。200mL的样品轻松搞定！ 蓝色的MCE、紫色的Nylon、白色的PTFE膜等在化学兼容性方面更为宽泛，适合含有特殊（有机）化学成分和酸碱性较强的样品。 白色的有PES膜，也有PTFE膜，具体规格根据客户需要。 处理量分别是15ml 、4ml，、2ml、 0.5ml 再生纤维素膜具有一系列截留分子量，有3KD，10KD，30KD，50KD，100KD。 使用超滤管的优势 高回收率> 90% 垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达?5?分钟 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低 100%?完整性检测确保性能可靠 透明外壳和体积刻度方便样品察看 直接吸取样品减少处理步骤 高浓缩倍数：80–100?倍 应用 ? 生物样品浓缩：包括抗原、抗体、酶、核酸或微生物 ? 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化 ? 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩 ? 脱盐和缓冲液更换 换浓缩蛋白时超滤管的处理 超滤管可以重复使用，用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，再在离心机上用相关溶液（灭菌水或PBS）清洗3次，即可用于浓缩新的蛋白； 长时间放置超滤管的处理 较长时间不使用的超滤管，在用0.1M的NaOH浸泡1－2h，用水清洗，用20％的乙醇浸泡保存，务必保持滤膜润湿，不能长菌； 超滤管使用的离心转速 离心转速一般采用4000rpm（一般建议为3000g，最大不能超过4000g）离心5－8分钟，即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升；速度过高，目的蛋白会离下，导致目的蛋白丢失；速度过低，耗时，工效低； 枪头伸入超滤管中时注意事项 加蛋白液或Buffer到超滤管时，可以用蓝枪头；但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入超滤管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜； 减少超滤管对蛋白的吸附损失 超滤管的滤膜能吸附蛋白，会导致目的蛋白减少可达30％左右；为减少蛋白损失，在吸尽目的蛋白液后，再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底，可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失；如纯化的蛋白较浓时，注意浓缩的体积不可过小；一般无论如何离心，底部会保留有200 μl左右的蛋白液；