基因表达技术课件摘要.ppt

体系选择 研究基因功能： 大肠杆菌, 裂殖酵母,昆虫细胞, CHO细胞 多肽药物生产： 大肠杆菌, 毕氏酵母, CHO细胞, 乳腺组织 疫苗： 大肠杆菌, 酵母, 多数沿用细胞培养产物进行灭毒 单抗生产：杂交瘤细胞 工业酶生产：各种微生物 His-tag (6-8 Histidine) T7-tag (MASMTGGQQMG) HSV-tag (QPELAPEDPED) S-tag (KETAAKFERQHMDS) VSV-G-tag (TTDIEMNRLGK) HA-tag (YPYDVPDYA) Flag-tag (DYKDDDDK) Myc-tag (EQKLISEEDL) 各种用于抗体识别的标记 如果所表达的蛋白质有二硫键并需要正确的立体结构, 尽可能进行可溶性表达; 如果所表达的蛋白质没有二硫键或只用来制备抗血清, 采用包含体表达比较好; 如果希望表达的多肽的分子量小于10 kDa, 一定要进行融合表达 采用MBD融合 采用GST融合 采用CBD融合 采用thioredoxin融合 采用Origami等宿主菌 降低菌体培养的速度 温度 (15-30℃), 降低转速 让表达产物可溶化 透析法: 简单; 但费时, 费缓冲液, 蛋白质浓度不能过高(容易产生沉淀) 快速稀释法: 最常用的