11高效液相色谱A要点.pptVIP

11 高效液相色谱法 (HPLC) 高效液相色谱仪方框图 色谱检测器（对流出物进行连续检测） 色谱数据处理 色谱柱（固定相、填料） 色谱柱的结构 柱填料 固定相类型 (Stationary phase) 键合相类型 柱性能测试 : 应指定色谱条件和检测物质 流动相 (Mobile phase) 流动相溶剂的选择 梯度洗脱技术 1．梯度洗脱的特点 2．梯度洗脱的主要条件 3．梯度洗脱的基本原理 * High Performance Liquid Chromatography High Perssure Liquid Chromatography High Speed Liquid Chromatography HPLC是在经典液体柱色谱的基础上, 在色谱理论指引下，加以改进而发展起来的。特别是GC迅速成为一种仪器分析方法和社会需要分离分析难挥发复杂样品促进了HPLC的发展。近年来它以6-8%的增长率发展，目前年发表论文数已超过GC。2000年仪器销售全球第一。 高效液相色谱仪基本装置 流动相 进样阀 注入样品液 色谱柱 检测器 色谱处理机 高压泵 流出液 流动相→高压泵→进样器→色谱柱→ 检测器→积分仪 ◎ 流速控制 ◎ 阀进样 ◎ 温度效应 流动相供给和输送 进样 分离 检测 记录、数据处理 色谱工作站（计算机）：控制显示 温度控制 收集 ◆??? 流路系统（分析单元）：高、低压流路 ◆???电路系统（控制单元）：信号传输与处理 检测器实际上是一种换能装置, 它将流动相中组分含量的变化, 转变成可测量的电信号(通常是电压), 然后输入记录器。从原理分析，任何一种分析鉴定方法都可能色谱检测器。理想的检测器应该是灵敏度高、线性范围大、对所有待测组分相同响应。一般检测器分为； ● 热学、光学、电学、电化学。。。检测器 ● 总体性质检测器：热导、示差折射、电导 溶质性质检测器：氢焰、紫外、荧光 ● 通用检测器与选择型检测器 ● 浓度型检测器和质量型检测器 检测器的线性、灵敏度和柱外效应三个基本特性直接影响色谱定量分析的准确度、精密度和再现性。 ◆ 检测器的线性范围 大部分厂商都声称它们的检测器在一定的浓度范围内是线性响应。实际上检测器的线性方程可表示为：y = a c? , 只有在三个数量级的浓度范围内满足0.98 ? ? ? 1.02的线性响应的检测器才是线性的。 ◆ 灵敏度 色谱分析中有三种不同的灵敏度表示法, 检测器本身的灵敏度, 整个色谱体系的浓度灵敏度和质量灵敏度。 对于定量分析来说, 重要的是色谱体系的灵敏度, 因为它还包括柱子和仪器的其它部分的影响。 检测器的灵敏度(CD), 实际上指检测限, 即通常指相当于两倍噪音信号的溶质浓度。而色谱体系的最小检测限应是柱外效应10%的最大进样体积所对应的二倍于噪音峰高所对应的样品浓度。而色谱分析最重要的是色谱体系的质量灵敏度, 最小可测量： m = 2?CCD , ?C是柱内效应的标准偏差。 或 m = 6.25?e(1＋k) , ?e是柱外效应的标准偏差。 ◆ 检测器的色区展宽 对于毛细管气相色谱和高效液相色谱，检测器的色区展宽是柱外效应的一个主要来源。一般仪器厂商在设计时已把检测器的色区展宽减少到最低程度。 分离柱 检测器 记录仪 积分仪 色谱工作站 色谱仪信号输出方框图 色谱数据处理通过ADC转换器, 把模拟信号转换成数字信号, 然后采用色谱软件处理给出色谱图等信息。 数据处理原理： ◆ 峰的检测 ◆ 数据采集 ◆ 基线校正和重叠峰的分离 自动处理 人工修正 色谱柱是色谱仪的心脏（起分离作用），其核心是优质固定相（填料） 。进行色谱分离的首要工作是选择性能良好的色谱柱，即在确定的分离条件下分离效率高和分析时间短的色谱柱。 色谱柱的选择应考虑： 固定相类型的选择, 主要取决于样品分离模式； 柱填料的结构, 主要指颗粒的形状大小、均匀性、比表面、平均孔径和孔容等； 柱规格指柱内径、柱长度和填料粒度 色谱柱的牌号/厂商。 色谱柱由柱管、填料、密封圈、过滤板、柱头等组成。应特别注意柱头规格及无死体积连接的特性。 柱规格 制备柱 分析柱 微径柱液相色谱 (Micr