乙肝六项操作及检验结果的解释要点.ppt

乙肝六项的操作、注意事项及检验结果的解释 乙肝六项操作HBSAg (双抗体夹心法） 原理 在微孔条上预包被，被纯化的乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。 乙肝六项操作HBSAg (双抗体夹心法） 操作步骤 一.准备 1.1平衡：将试剂盒各组分别取出，平衡至室温（18-25℃）， 1.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解）， 浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按25倍稀释后使用。 1.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 乙肝六项操作HBSAg (双抗体夹心法) 二.HBSAg操作 2.1加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各75?l于相应孔中。 2.2温育：置37℃温育60分钟。 2.3 加酶：不用洗涤，分别在每孔中加入酶标记抗体50?l，轻轻混匀。 2.4 温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。 2.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 2.6显色：每孔加入底物A、B各50?l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。 2.7终止：每孔加终止液50?l，混匀。 三.HBSAg测定 用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 乙肝六项操作HBSAg (双抗体夹心法) 乙肝六项操作HBeAb检测（ELISA)竞争法 乙肝六项操作HBeAb检测（ELISA)竞争法 四 .结果判断与分析 临界值（C.O.）的计算： 临界值＝（阴性对照孔OD值N+阳性对照孔OD值P）×0.5， 结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBeAb阳性 样品OD值S/C.O1者为HBeAb阴性 注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBeAb的含量成反比。 乙肝六项操作HBCAb测定（竞争法） 原理 在微孔条上预包被，被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。 乙肝六项操作HBCAb测定（竞争法） 试剂准备同上 加样：每测定孔加入50?l样品。对照孔中加入阴、阳性对照血清各50?l。作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水；（作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验）。 加酶：每孔加入酶标记抗体50?l，轻拍混匀。 育温：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 显色：每孔加入底物A、B各50?l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。 终止：每孔加终止液50?l，混匀。 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 结果判断与分析 临界值（C.O.）的计算： 临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5（未稀释临界值＝阴性对照孔OD值N×0.3） 结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBcAb阳性 样品OD值S/C.O1者为HBcAb阴性 注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBCAb的含量成反比。 乙肝六项操作HBCAb-lgM(捕获法） 测定原理 采用兔抗人HbcAg- IgM包被固相载体反应板，加入待测标本，同时加入HbcAg-HRP，当标本中存在HbcAb时，该HbcAb-IgM与包被HbcAg结合并与酶结合形成HBcAg-HbcAb-HBcAg-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 乙肝六项操作HBCAb-lgM(捕获法） 操作步骤 1.待测样品用生理盐水作1:1000稀释，每孔加人稀释样品100微升，设阴、阳性对照各2孔，每孔加人阴性对照(或阳性对照) 各100微升(或2滴)，并设空白对照1孔，封板，置37 ℃孵育20分钟。 2..手工洗板:弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复3次后拍干。 洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。 3.每孔加入HBcAg30微升(或1滴)，酶结合物50微升(或1滴)(空白对照孔除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育20分钟 4..手工洗板:弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。 洗板机洗板:选择洗涤5次程序洗板后拍干。 5..每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升(