第七生产菌种的扩大培养与保藏.ppt

第七章 生产菌种的扩大培养与保藏 第一节 种子扩大培养的概述 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 发酵工业生产过程中的种子的必须满足以下条件： （1）菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； （2）生理状况稳定,个体与群体都要满足同一生长要求； （3）菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求； （4）无杂菌污染； （5）保持稳定的生产能力。 工业微生物菌种培养的类型： 工业微生物的培养法分为静置培养和通气培养两大类型。 静置培养法即将培养基盛于发酵容器中，在接种后，不通空气进行发酵，又称为嫌气性发酵。 通气培养法的生产菌种以需氧菌和兼性需氧菌居多，它们生长的环境必须供给空气，以维持一定的溶解氧水平，使菌体迅速生长和发酵，又称为好气性发酵。 在静置和通气培养两类方法中又可分为液体培养和固体培养两大类型，其中每一类型又有表面培养与深层培养之分。 主要培养方法及特点： （1）表面培养法 包括茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 （2）固体培养法 包括三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。 （3）液体培养法 包括液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。摇瓶通气量大小与摇瓶机型式、转数、振程(或偏心距)、三角瓶容量、装料量有关。 （4）载体培养法 以天然或人工合成的多孔材料代替麸皮之类的固态基质作为微生物的载体。 （1）表面培养 表面培养是一种好氧静置培养方法 针对容器内培养基物态又分为液态表面培养和固态表面培养。 相对于容器内培养基体积而言，表面积越大，越易促进氧气由气液(气固)界面向培养基内传递，包括茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 这种培养方法菌的生长速度与培养基深度有关，单位体积的表面积越大，生长速度也越快。 氧的供给常成为发酵的限速因素，所以发酵周期长，占地面积大。 优点是不需要深层培养时的搅拌和通气，节省动力。如醋酸、柠檬酸发酵和曲盘制曲。 （2）固体培养 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 固体培养具有以下优点： ①原料：以谷物和农业废物为主要原料，只需外加适量水分、无机盐等。培养基组成简单。 ②防止污染：利用霉菌能在水分较低的基质表面进行增殖的特性，在这种条件下，细菌生长不好，因此不易引起细菌污染。 ③通气：无论浅盘或深层固体通风制曲，可以在曲房周围使用循环的冷却增湿的无菌空气来控制温湿度，并且能根据菌种在不同生理时期的需要，灵活加以调节。在固体培养中，氧气是由基质粒子间空隙的空气直接供给微生物，比液体培养时的用通气搅拌供给氧气节能。 缺点是劳动强度大 （3）液体深层培养 用液体深层发酵罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。这种由罐底部通气搅拌的培养方法，相对于由气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法来讲，称为深层培养法。 特点是容易按照生产菌种对于代谢的营养要求以及不同生理时期的通气、搅拌、温度、与培养基中氢离子浓度等条件，选择最佳培养条件。 深层培养基本操作的3个控制点 ①灭菌：发酵工业要求纯培养，因此在发酵开始前必须对培养基进行加热灭菌。所以发酵罐具有蒸汽夹套，以便将培养基和发酵罐进行加热灭菌，或者将培养基由连续加热灭菌器灭菌，并连续地输送于发酵罐内。 ②温度控制：培养基灭菌后，冷却至培养温度进行发酵，由于随着微生物的增殖和发酵会发热、搅拌产热等，所以为维持温度恒定，须在夹套中以冷却水循环流过。 ③通气、搅拌：空气进入发酵罐前先经空气过滤器除去杂菌，制成无菌空气，而后由罐底部进入，再通过搅拌将空气分散成微小气泡。为了延长气泡滞留时间，可在罐内装挡板产生涡流。搅拌的目的除了溶解氧之外，可使培养液中微生物均匀地分散在发酵罐内，促进热传递，以及为调节pH而使加入的酸和碱均匀分散等。 几种深层培养法： ①放大法 ②两步法 ③控制培养法 ④分批发酵法(间歇发酵法) ⑤连续培养法 ⑥补料分批培养法(流加法) ①放大法 将微生物在摇瓶基础上逐级放大以实现大规模生产。 在厌气发酵时问题归结为如何从大型发酵罐中除去发酵热。除去发酵热的方法主要是利用冷却水，另外还可考虑如何利用发酵时生成的二氧化碳引起的液体流动和辅助搅拌，以提高冷却效率。 在好氧培养中，大多以氧的供给为基准进行放大。一般从实验室规模到工厂生产要经过3—5级放大步骤。 放大过程中应考虑： a．氧传递速度相等。 b．比较不同级时搅拌桨叶顶端速度。 c．比较不同级时单位液量所需的搅拌动力。 d．混合时间相同。 e．雷诺准数相同