第八章RNA转录后的剪接与加工重点分析.pptVIP

RNA的转录复习 原核生物与真核生转录的异同点？ 第八章RNA转录后的剪接与加工 几个概念 核内不均一核RNA mRNA的原初转录产物在核内形成的大小不等的中间物，相对分子质量很大，也很不均一，我们将其称为核内不均一RNA。 sRNA (100-300 base, 0-106/cell):？ 1）scRNA: 细胞质中小分子RNA称细胞质小RNA (small cytoplasmic RNA)。 2）snoRNA: 在核仁中存在的一类小的RNA，称为核仁小RNA (small nucleolar RNA)。 3）snRNA: 细胞核中的小分子RNA称细胞核小RNA (small nuclear RNA)。与核内的蛋白质构成核小核糖核酸蛋白体(snRNP)，在内含子上装配成剪接体(splicesome)，参与mRNA的剪接。 tRNA和rRNA被加工的证据 rRNA和tRNA有以下三点特性： 1） 所有RNA初级转录产物的5`末端均是5`-三磷酸，而成熟rRNA和tRNA分子的5`末端是5`单磷酸； 2）rRNA和tRNA分子比初级转录产物小很多； 3）所有tRNA含有稀有碱基。 E. coli 7个rRNA转录单位分散在基因组中；转录单位由16S、23S、5SrRNA以及tRNA基因组成，rrnA~rrnG. 8.1.2 原核生物tRNA的加工 tRNA前体的存在方式： 不同的tRNA串联排列； 多个相同的tRNA串联排列； tRNA与rRNA混合串联排列。 修饰过程： 由RNA核酸内切酶在tRNA分子5`端切断； RNaseP 由RNA核酸内切酶在tRNA分子3`端切断； RNaseF tRNA分子3`端添加-CCAOH； RNaseD 核苷酸的修饰与异构化 8.1.3 原核生物mRNA的加工 8.2 真核生物RNA的加工 剪接加工是RNA分子转录后水平的基因表达调控方式之一。 tRNA、rRNA：切除间隔序列，内含子剪接，5`和3`端的修饰以及碱基的修饰等。 8.2 真核生物RNA的加工 mRNA：非常复杂，需要snRNA 的参与，与蛋白质因子构成核糖核蛋白体(snRNP)。 在剪接过程中形成的剪接复合物称为剪接体,剪接体的主要组成是蛋白质和小分子的核RNA(snRNA)。复合物的沉降系数约为50～60S,它是在剪接过程的各个阶段随着snRNA的加入而形成的。也就是说在完整的pre-mRNA 上形成的一个剪接中间体。剪接体的装配同核糖体的装配相似。依靠RNA-RNA、RNA-蛋白质、蛋白质-蛋白质等三方面的相互作用。比核糖体更复杂，要涉及snRNA的碱基配对， 相互识别等。 8.2.1 tRNA的转录后加工 主要有以下几种加工方式： 切断： “斩头”，形成5′末端；去尾，形成3′-OH末端。 。 剪接。 3’-末端-CCA序列添加：缺-CCA的tRNA要用tRNA核酸转移酶加-CCA 。 化学修饰：通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等进行修饰，如氨基酸臂的4-硫尿苷（4tu），D臂的2甲基鸟苷（2mG），TψC臂的假尿苷（ψ）和反密码子环上的2异戊腺苷（2ipA) 。 真核tRNA的基因和原核不同：？ (1)真核的前体分子tRNA是单顺反子，但成 簇排列，基因间有间隔区； (2)真核tRNA基因一般都比原核tRNA基因多 得多，如酵母约有400个tRNA基因； (3) tRNA的前体分子中含有内含子。 真核tRNA内含子的特点： ①位置相同，都在反密码子环的下游； ②不同tRNA的内含子长度和序列各异； ③外显子和内含子交界处无保守序列； ④内含子的剪切是依靠RNase异体催化； ⑤内含子和反密码子配对形成茎环。 8.2.2 真核细胞中rRNA的加工 8.2.3 剪接方式的分类 内含子的剪接分三类： 1、自我剪接的内含子： I型和II型 2、蛋白质(酶)参与的内含子 主要存在于tRNA中 3、依赖于snRNP的内含子 真核细胞核的蛋白质 8.2.4 真核mRNA的转录后加工 一、hnRNA (一)核内不均一RNA (heterogenous nuclear RNA, hnRNA)平均分子长度为8-10Kb(2Kb~14Kb)左右。比mRNA的平均长度(1.8-2Kb）要大4-5倍。 hnRNA仅有总量的1/2转移到细胞质内，其余的都在核内被降解掉。 hnRNA是mRNA的前体，证据是： (1) hnRNA和mRNA有相同的序列； (2) hnRNA在体外能作为模板翻译蛋白； (3) 两者5′端都有帽子结构，表明二者为相同的聚合酶所合成； (4) 两者的3′端都有多聚腺苷有尾