生物样品前处理方法.重点分析.ppt

一、样品前处理的重要性 由于食品样品属于复合基质体系,多含有蛋白、油脂,碳水化合物、色素等成分,复杂的基质背景会对被分析目标化合物的提取、分离、净化和测定等带来很大的麻烦,因此食品的样品前处理不仅复杂困难,而且对于分析结果的准确可靠和灵敏具有决定性作用。 为何需要样品前处理? 为何需要样品前处理? 样品前处理原则 ①制备过程中避免组分发生化学变化； ②要防止和避免欲测定组分的沾污； ③尽可能减少无关化合物引入制备过程； ④尽可能简单易行。 动物细胞的破碎 机械法：挤压或剪切；研磨；高压匀浆法；超声波破碎法等 非机械法：酶消化法；化学渗透法；冻融法；干燥法等 表面活性剂：对某些组分有增溶作用，有助于细胞破碎。 EDTA螯合剂：与生物膜中Ca2+、Mg2+ 结合，破坏原有结构。 有机溶剂：高级醇、氯仿、苯等，与和平利用膜类脂质相溶，破坏生物膜。 变性剂：与水中氢键作用减弱水的极性，使疏水性化合物溶于水。 组织捣碎机 SPE技术—填料颗粒基质 硅胶基质—键合各种官能团 如，{C18, C8, NH2, QMA ...} 不规则填料 小柱(Cartridges)： 40 - 80 ?m Disks：8 -10?m 活性碳(AC2) 表面衍生剂涂层 (DNPH) 聚合物基质 (最新技术) — Oasis 球形填料 30/60?m SPE填料的类型 正相填料 溶剂：正己烷 填料：硅胶（ Silica ）氧化铝, Florisil?, 氨基, 二醇基… 反相填料 溶剂：MeOH/水 填料：C18/C8/Oasis HLB 离子交换填料 溶剂：缓冲液/盐流动相 填料：Accell CM/Accell QMA/Oasis MCX/MAX/WAX/WCX SPE各种填料 分离模式 反相 正相 离子交换 复合模式 分离模式 反相萃取 （极性液体相，非极性改良固体相） 疏水性相互作用 非极性—非极性相互作用 范德华力或色散力 硅胶键合C18,C8, C4，C2,-苯基等，可以从强极性的溶剂中吸附是非极性到中等极性的化合物。 分离模式 正相萃取 （非极性液体相，极性改良固体相） 亲水性相互作用 极性—极性相互作用 氢键 π-π相互作用 偶极－偶极相互作用 偶极－诱导偶极相互作用 　 极性键合相，如硅胶键合－NH2、－CN，-Diol（二醇基）；极性吸附剂，如Silica、Florisil、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等，可以从强极性的溶剂中吸附是非极性到中等极性的化合物。 分离模式 离子交换 带有电荷的化合物靠静电吸引到带有电荷的吸附剂表面 按键合的离子基团的性质分类： 阳离子交换柱 阴离子交换柱 按在水溶液中解离的程度： 强酸性(SCX, Strong cation exchange) 弱酸性(WCX,Weak cation exchange) 强碱性(SAX, Strong anion exchange) 弱碱性(WAX, Weak anion exchange) 分离模式 反相吸附原理 离子交换原理 Oasis? 系列固相萃取吸附剂的演变:从纯反相保留模式到复合保留模式(IE+RP) OH O SPE一般性分析操作步骤 活化:依次用强溶剂、弱溶剂（缓冲溶液）进行活化； 上样：用能够溶解样品的弱溶剂携带样品上柱，既要保证样 品分析物的有效溶解，又要确保溶剂强度不至于把被分析化合物从柱上洗脱下来； 淋洗：用具有一定强度的混合溶剂淋洗去除干扰杂质，确保杂质被洗脱，而被分析化合物有效的保留在柱上； 洗脱：用较强的溶剂把被分析化合物从柱上替换洗脱下来。 SPE技术对流速的一般要求 活化及平衡 5 -10 mL/min 上样 0.5 - 5 mL/min - 液流不能成线 清洗 1 - 5 mL/min 洗脱 0.5 - 5 mL/min- 液流不能成线 与SPE产品的规格及色谱类型有关 SPE使用注意事项及关键控制点 根据分析目标物的理化性质选择合适的SPE柱； 一般SPE柱要防止干涸； 注意控制柱载量，防止穿透过载； 严格控制上样液和洗脱液滴速； 防止混浊样品堵塞柱子； ．．．．．． 4、GPC净化系统 Gel Permeation Chromatography，GPC 根据溶质分子大小进行分离的色谱技术 GPC系统 GPC净化适用法规及推荐方法 US EPA SW-846 方法3640A FDA杀虫剂分析方法 AOAC 分析方法 DFG S19 GPC净化适用法规及推荐方法 Why “GPC”? 减少对仪器的损害和待机时间 提高准