食品质量与安全实验技术-指导书-2014-4-9要点分析.docVIP

《食品质量与安全实验技术》 （实验指导） 指导教师：龚加顺 云南农业大学食品学院 二0一0年三月 实验一 食品中多糖的测定 一、实验目的 掌握多糖的测定方法。 二、实验原理 苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490nm下有最大吸收，吸收值与含糖量呈线性关系。 三、实验试剂 浓硫酸、80%苯酚：80g苯酚加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期保存。 6%苯酚：临用前用80%苯酚配制、分析纯葡萄糖、苹果、大白菜、山药。 四、实验步骤 1、制作标准曲线 准确称取分析纯葡萄糖20mg于500mL容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL、1.8 mL、，各以水补至2.0mL，然后加入6%苯酚1.0及浓硫酸5.0mL,静置10min，摇匀，室温放置20min以后，于490nm测定其吸光值，以横坐标为多糖微克数，纵坐标为吸光值，得到标准曲线。 2、样品含量的测定 分别准确称取苹果、大白菜、山药各10.00g，捣碎后，加水研磨，滤纸过滤，滤液定容至100Ml，备用。 样品测定：吸取样液1.0mL，按上述步骤操作，测490nm下的吸光值，以标准曲线计算新鲜苹果、大白菜中多糖含量。 四、思考题 1. 多糖对人体有何作用？ 2. 结合测定的数据，讨论苹果中的多糖和大白菜中的多糖能否起相应的作用？ 实验二 食品中蛋白质含量的测定---考马斯亮蓝法 一、实验目的 学习利用考马斯亮蓝比色法测定食品中蛋白质的含量 二、实验原理 根据考马斯亮蓝试剂与蛋白质以范德华力结合为红色或蓝色溶液，颜色的深浅与蛋白的含量成正比，在595nm有最大吸收。 三、试剂与器材 1、考马斯亮蓝试剂 考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL95%乙醇中，加入100mL85%磷酸,用蒸馏水稀释至100mL,滤纸过滤，最终试剂中含有0.01%(W/V)考马斯亮蓝G-250,4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)磷酸。 2、蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，根据其纯度用0.15mol/LNaCl配成1mg/mL蛋白溶液。 3、样品： 绿茶、果汁饮料 四、标准曲线的绘制 （1）标准蛋白液：牛血清蛋白（0.1mg/mL），准确称量牛血清蛋白0.1g，用0.9%的NaCl溶液溶解并稀释至1000mL。 （2）染液：考马斯亮兰G250（0.01%），称量0.1g考马斯亮兰G250溶于50ml的乙醇中，加入100mL浓磷酸，再加蒸馏水定溶到1000mL。分别取0ml,0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml,0.6ml, 0.7ml,0.8ml,0.9ml,1.0ml于试管中，均用水补足至1.0ml，各加4ml考马斯亮兰染液，然后混匀，室温静止3min，以第一管为空白，于波长595nm处比色，测得吸光值。 五、样品制备 1. 茶汤样品制备：准确称取绿茶3.00g，加入沸腾的蒸馏水150mL，浸泡30min，期间不断搅拌，滤纸过滤，滤液定容至150mL，备用。 2. 果汁饮料制备：摇匀后直接取样。 六、样品测定 取0.1mL茶汤或饮料，加5mL考马斯亮蓝试剂，其余操作同标准曲线的绘制，从标准曲线算得蛋白质的含量。每个样品重复测定三次，每次做三个平行。 标准曲线的绘制： （1）标准蛋白液：牛血清蛋白（0.1mg/mL），准确称取牛血清蛋白0.1g，用0.9%的NaCl溶液溶解并稀释至1000mL （2）染液：考马斯亮兰G250（0.01%），称取0.1g考马斯亮兰G250溶于50mL的乙醇中，加入100mL磷酸，加蒸馏水定溶到1000mL分别取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于试管中，均用水补足至1.0mL，各加4mL考马斯亮兰染液，然后混匀，室温静止3min，以第一管为空白，于波长595nm处比色。 如图1，标准曲线Y=6.09X-0.001 (Y为吸光值，X为标准蛋白浓度，单位为mg/mL)，R2=0.996。 图1 蛋白质标准曲线 实验三、 市售饮料中维生素C的测定（碘滴定法） 实验原理 碘测定维生素C的方法是以碘作氧化剂，当被维生素C还原直至原样品液中维生素C完全氧化后，过量的碘遇淀粉指示剂呈蓝色。 材料、仪器用具、试剂 1.材料 鲜橙多果汁 2.仪器用具 烧杯、三角瓶、100mL容量瓶、10mL移液管、微量滴定管、漏斗、脱脂棉花、分析天平。 3.试剂 0.0005mol/L碘液、1%草酸溶液、1%淀粉溶液、标准抗坏血酸溶液（溶解100mg纯抗坏血酸于100mL1%草酸中，配成1mg/1mL的浓度）。 三、碘液标定 吸取标准抗坏血酸溶液2mL，加1%草