荧光光谱的原理及应用重点分析.pptVIP

荧光光谱的原理及应用 荧光是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 磷光是一种缓慢发光的光致冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线）照射，吸收光能后进入激发态（具有和基态不同的自旋多重度），然后缓慢地退激发并发出比入射光的的波长长的出射光，而且与荧光过程不同，当入射光停止后，发光现象持续存在。发出磷光的退激发过程是被量子力学的跃迁选择规则禁戒的，因此这个过程很缓慢。 主要内容 荧光光谱的基本原理 单重态能级间的跃迁符合光谱选律，跃迁概率大。分子通过吸收辐射而直接被激发到三重态的跃迁是禁阻的，概率很小。 荧光产生的过程： （1）处于基态最低振动能级的荧光物质分子受到紫外线的照 射，吸收了和它所具有的特征频率相一致的光线，跃迁到第一电子激发态的各个振动能级； （2）被激发到第一电子激发态的各个振动能级的分子通过 无辐射跃迁降落到第一电子激发态的最低振动能级； （3）降落到第一电子激发态的最低振动能级的分子继续降 落到基态的各个不同振动能级，同时发射出相应的光量子，这就是荧光： （4）到达基态的各个不同振动能级的分子再通过无辐射跃迁最后回到基态的最低振动能级． 激发光谱与发射光谱的关系 关于激发光的波长λ1： ①决定荧光物质是否能够产生吸收并发射出荧光； ②能够使荧光物质产生吸收并发射出荧光的激发光的波长并不具有唯一性； ③在保证激发的前提下，不同激发波长处的荧光发射光谱相同，但荧光强度不同。 ④在进行荧光测定时，须选择激发光波长以保证荧光强度最大。 镜像规则的解释 三、荧光的产生与分子结构的关系 1.分子产生荧光必须具备的条件 （1）具有合适的结构； （2）具有一定的荧光量子产率。 1.化合物的结构与荧光  物质分子发射荧光的能力用荧光量子产率（Φ）表示： Φ与失活过程的速率常数k有关： 凡是使荧光速率常数kf增大而使其他失活过程（系间窜越、外转换、内转换）的速率常数减小的因素（环境因素和结构因素）都可使荧光增强。 四、影响荧光强度的外部因素 3 pH值的影响 含有酸性或碱性取代基的芳香化合物的荧光与pH有关。pH的变化影响了荧光基团的电荷状态，从而使其荧光发生变化。 4.内滤光作用和自吸现象 5.荧光熄灭剂 光源： 高压氙灯发出的光线强度大，而且是连续光谱，通用性较好，但氙弧灯热效应大，稳定性较差，对电压稳定性要求较高。 高功率连续可调激光光源是一种新型荧光激发光源。激光的单色性好、强度大。激光光源近年来应用日益普遍。 单色器： 第一单色器——选择激发光波长λ1 （＞250nm的紫外光），称为激发单色器。 第二单色器——选择(测量)发射光（荧光）波长λ2 ，与激发光入射方向垂直，称为荧光单色器。 样品池： 采用低荧光材料，通常为四面透光的石英池。 检测器： 光电倍增管。 1.定量依据与方法 （2）定量方法 2 、荧光光谱的应用 2 荧光量子产率Φ 1.溶剂的影响 溶剂极性增加，有时会使荧光强度增加，荧光波长红移。 若溶剂和荧光物质形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使荧光强度、荧光波长改变。 含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光减弱，磷光增强。 溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般是温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升，荧光强度下降。 2.温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，分子运动速度加快，分子间碰撞的几率增加，外转换去活的几率增加，荧光效率降低。例如荧光素钠的乙醇溶液，在0℃以下，温度每降低10℃，? f增加3％，在?80℃时， ? f为1。 0 C6H5NH3 + 20 C6H5NH2 0 C6H5O— 18 C6H5OH 相对荧光强度 化合物 自吸现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收 光谱的长波长端重叠，产生自吸收；如蒽化合物。 内滤光作用：溶液中含有能吸收激发光或荧光物质发 射的荧光，如色胺酸中的重铬酸钾； 荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂(quenching medium)。如卤