DNA的复制重组与修复.ppt

第十二章 DNA的复制、修复和重组 第一节 　　　DNA的代谢 第二节 　　DNA复制的一般规律 一、关于模板的概念 模板（template）： 1.早期推测模板分子的表面可以让许多小分子按一定排列顺序排列，然后连接这些小分子形成有特定结构和功能的大分子。 2.Watson-Crick DNA双螺旋结构表明，DNA双链严格按碱基配对互补，故，如以一条链为模板，可合成另一条有既定顺序的互补链。 二、DNA复制是半保留的 半保留复制(semi conservative replication): 亲代的DNA双链，每条链都可作为模板，复制一条新链。二个子代DNA分子碱基顺序与亲代分子完全一致，其中一条链来自亲代DNA链，另一条是新合成的。 三、DNA复制的起点与方向 复制从原点（origin）开始双向进行的 John Cairns experiment 四、DNA的复制是半不连续的 DNA合成的方向为5′?3′，复制是半不连续的。 第三节 　　　　DNA聚合酶 一、DNA是由DNA聚合酶催化合成的 1955年，Arthur Kornberg 及其同事从 E. coli发现I 型DNA 聚合酶（DNA polymerase I ）。 DNA聚合反应的两个基本规律： 1. 所有DNA聚合酶催化DNA合成均需要模板（all DNA polymerases require a template）. 2. 聚合反应需要引物（a primer is required）. 二、E.coli的三种DNA聚合酶 DNA polymerase I (pol Ⅰ，Kornberg酶): 1.催化的反应： (1) 5′→3′的聚合活性; (2) 5′→3′外切酶活性：切除引物，切除突变片段。 (3) 3′→5′外切酶活性：切除错配的碱基。 3.主要功能： (1)在DNA复制、重组和修复起修缮工作用（ 5′→3′外切酶活性）（This enzyme serves a host of “clean-up” functions during replication, recombination, and repair.） (2)对复制中的错误进行校读（ 3′→5′外切酶活性，5′→3′ 聚合酶活性）； 切口位移作用（nick translation）: Pol I 的5′→3′ 外切酶活性可切除与模板链配对的 RNA 或 DNA 片段, 并同时用一条新合成的DNA链取代之。 DNA聚合酶Ⅱ（ polⅡ） 1. 5′→3′聚合 ; 2. 3′→5′外切。 具有高度专一的DNA修复功能（appears to have a highly specialized DNA repair function ）。 1.全酶含10种亚基,为不对称二聚体。 2.α,ε和θ 组成核心酶 （α具有5′→3′聚合 酶 活性， ε具有3′→5′外切酶活性和碱基选择功能） 。 3. ? 使核心酶形成二聚体。 4.γ２δδ′χψ构成钳安装复合物。 5.核心酶二聚体＋钳安装复合物?Ⅲ*型DNA聚合酶（连续性低）。 4.β 形成围绕模板链的滑动钳，使酶沿模板链滑动?防止酶从模板解离?连续性↑。 三、 DNA聚合酶催化DNA合成的精确性 1.正确和错误核苷酸的区分： 依靠互补碱基正确配对建立的氢键: 不正确的碱基不能与模板链上的碱基形成正确的氢键。 2.DNA聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能： pol Ⅲ的ε亚基。 3.复制中出错时有即时的校读功能： pol Ⅰ的3′→5′外切酶活性。 四、DNA复制需要许多酶和蛋白质因子 E.coli的DNA复制需要至少20个酶和蛋白组成的DNA复制酶系统或复制体（the DNA replicase system or the replisome） 解旋酶（helicases） DNA拓扑异构酶（topoisomerases） DNA单链结合蛋白（single strand DNA binding proteins,SSB) 引物酶（primases） DNA连接酶（DNA ligases） 第四节 　　细胞DNA复制的阶段性 一、起始（initiation） E. coli的复制原点oriC由 245 bp组成： 二、延长（elongation ） 前导链的合成： 1. 引物（primer）的生成:由引物酶（primase）催化 （1）细菌：50~100nt； （2）哺乳动物细胞：10nt。 2.在RNA primer上由 pol