Chapter吸附色谱.ppt

液相色谱基础 吸附色谱 吸附/分配色谱 正相色谱 反相色谱 目录 极性 HPLC所用溶剂的分类 正相色谱 反相色谱 固定相 pH值对保留的影响 离子对色谱 极性－化合物的行为 同样遵循相似相容原理 极性化合物被其他极性化合物吸附 非极性化合物被其他非极性化合物吸附 极性化合物不被其他非极性化合物吸附 极性量度－固定相 有机化合物极性－流动相 极性量度－官能团 极性 基于极性的分离 正相色谱 Tswett当时使用的就是正相色谱 极性固定相 非极性流动相 反相色谱 当代大部分应用都是反相色谱 非极性固定相 极性流动相 正相色谱机理－吸附 洗脱顺序 极性小先洗脱 极性大后洗脱 正相色谱－举例 正相色谱－不同色谱柱的分离 主要变了什么色谱参数？ 正相色谱 典型的流动相 典型的固定相 正己烷 硅胶 甲基叔丁基醚 NH2 乙酸乙酯 二醇 二氯甲烷 氧化铝 反响色谱的机理－分配 洗脱顺序 极性强 先洗脱 极性弱 后洗脱 反相色谱－举例 主要变化了哪个色谱参数？ 反相色谱在不同的色谱柱 反相色谱 典型的流动相 水 甲醇 乙腈 THF 典型的固定相 C18(ODS18) C8 C4 苯基柱 氨基柱 腈基柱 传统的高纯硅胶机理 硅胶的结构 孔径 大部分硅胶填充物是多孔的 超过99％的表面积是在颗粒的里面（而不是在表面），色谱行为也是发生在这里 经验法则 孔的大小越小，表面积越大 (100 ?, 300m2/g) (300 ?,100m2/g） 表面积越大，保留越强 典型的填充柱4.6×150mm 的表面积大约为100-500m2 你知道100-500m2/g有多大 硅胶颗粒大小=5μm 表面积= 300 m2/g 足球场=6500m2 22 g 硅胶的孔结构 什么是硅羟基 聚合过程中没有反应的表面残留的羟基基团 硅胶表面用于和配体如C18键合 硅胶中发现的表面硅羟基的类型 硅胶孔的结构 Si-O=硅羟基 合成键合相材料－单功能团 C18键合的硅胶孔 端基封口 第一步键合上C18之后，第二步就要‘盖’住没有反应的硅羟基 小的硅烷基 减小硅羟基的活性（改善碱性化合物的峰型） 在pH2时快速水解 C18 键合并端基封口后 键合相填充材料硅胶表面 注：即使是高键合度仍有超过50％的表面硅羟基是裸露的 硅胶填料pH值范围 键合相水解 键合相填料的水解 硅胶填料pH值范围 键合相水解 硅胶的溶解曲线 为何杂化颗粒柱可增加在高pH下的柱寿命？ 为什么你会看到差的峰型－硅胶离子化 表面硅羟基的电荷随着流动相pH的变化而变化 混合模式保留 峰形差带来的后果 积分错误 分离度降低 灵敏度降低 为什么不能在pH3下运行样品 宽pH值范围内的峰型 老的硅胶柱填料的改善和替代 高纯硅胶 减小拖尾 内嵌极性基团 减小拖尾 减少疏水塌陷的趋势 聚合物填料 拓宽pH值范围 差的机械稳定性 有机/无机杂化填料 拓宽pH值范围 减小拖尾 高柱效和稳定性 带有嵌入极性配体的色谱填料 杂化（C-Si）颗粒的合成 杂化填料的性质 高机械稳定性 pH1-12范围内是稳定的 对碱性化合物的拖尾减小 酸性化合物保留与pH值的关系 酸性化合物在反相色谱柱上的保留行为 在±2 pH 单位范围内变化时，酸性化合物保留行为的差异 碱性化合物保留行为与pH值的关系 碱性化合物在反相色谱柱上的保留行为 酸性、碱性和中性化合物的保留行为与pH 值的关系 离子对色谱机理 常用的离子对试剂 用于碱性化合物 戊烷磺酸钠 己烷磺酸钠 庚烷磺酸钠 辛烷磺酸钠 浓度 1-10mM 用于酸性化合物 四丁基铵 四己基铵 浓度 1-10mM 小结 正相色谱 极性小先洗脱 极性大后洗脱 反相色谱 极性大先洗脱 极性小后洗脱 离子型化合物的保留取决于pH 值 离子对色谱 可使离子型化合物保留更强 练习 在下面的色谱图中有三个化合物，1和2是中性化合物，3是碱性化合物，下面是他们的分离条件 流动相：45％甲醇，55%磷酸缓冲液 pH2.5 色谱柱：3.9mm×150mm，5μ C18 流速：1ml/min 柱温：室温 至少说出三种方式来改善它们的分离，对每种方式均说明改变了哪种色谱参数（k,α,N） 练习 下图中，假定用正相分离三种酞酸酯，邻苯二甲酸二甲酯，二乙酯，二丁酯，硅胶柱色谱柱。 指出相应的流动相是下面哪种： 乙酸乙酯/正己烷 20%/80％ 乙酸乙酯100% 正己烷100％ 指出三种酞酸酯的洗脱顺序 1. 2. 3. + HCl + + 在低pH