生物工程本科基因实验重点.docxVIP

基因工程试验 绿色荧光蛋白（GFP）在E·coliBL21中的表达 前言 绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。分子质量为26kDa，由238个氨基酸构成，其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光（第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团，是主要发光的位置）。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。其发光团的形成不具物种专一性，发出荧光稳定，且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定，对多数宿主的生理无影响，是常用的报道基因。 应用： 1． GFP作为报告基因GFP作为基因报告可用来检测转基因效率，把GFP基因连接到目的基因的启动子之后，通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。 2． GFP作为融合标签 GFP最成功的一类应用就是把GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。　　3.作为生物传感器 4. 检测pH 野生型GFP和其许多突变体都具有依赖于pH的荧光变化，因而可以被用来检测活细胞内的pH。　　3.2.2 检