DNA重组技术的基本工具().pptx

专题1 基因工程 什么是基因工程？ 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 本质： 意义： 基因重组 可以重组不同物种的基因，克服远缘杂交不亲和。 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——运载体 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 1、限制酶主要从原核生物中分离纯化，推测限制酶能否切断原核生物自身DNA？为什么？ 2、请推测原核生物含有的限制酶对原核生物有什么作用？ 原核生物中存在一种酶，这种酶能够切割外源DNA，但是对自己的DNA却无损害作用，从而达到保护自身的目的。含有限制酶的细胞中的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列和切割位点。 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 填写“限制性核酸内切酶——分子手术刀”的相关内容。 来源 种类 作用 结果 主要从原核生物中分离纯化而来 已经分离出大约4000种 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 形成两种末端：黏性末端或平末端 3 ′,5 ′ －磷酸二酯键 胞嘧啶脱氧核苷酸 －H2O O 磷酸二酯键 3’端 3’端 5’端 5’端 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 切割DNA分子后形成什么呢？ 产物：黏性末端（在中轴线两侧切割DNA） 平末端（在中轴线处切割DNA） EcoRⅠ （在G和A之间切割） SmaⅠ （在G和C之间切割） 黏性末端 平末端 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 EcoRI 限制酶的作用 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 EcoRI 限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 SmaI 限制酶的作用 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 在G与C之间切割 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 SmaI 限制酶的作用 平末端　　　平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 模块一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 连接磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表 模块二：“分子缝合针”——DNA连接酶 两DNA片段要具有相同的黏性末端才能拼起来 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ 模块二：“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低。 模块二：“分子缝合针”——DNA连接酶 A A T T G C DNA聚合酶的作用 DNA聚合酶是以DNA分子的一条链为模板，将单个核苷酸连接到已有的DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 （需要模板；用于DNA复制时；在单个核苷酸和DNA分子片段之间形成磷酸二酯键；形成DNA分子的一条链） 模块二：“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA连接酶是连接两个双链DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 （不需要模板；用于基因工程；在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键；形成完整的DNA分子） DNA连接酶的作用 模块二：“分子缝合针”——DNA连接酶 阅读教材P6，思考下面两个问题 1.常见的运载体有哪些？ 2.基因工程常用的质粒必须具有什么特点？ 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 （1）有一个或多个限制酶切割位点，供外源DNA插入 （2）能够自我复制 （3）具有标记基因，供重组DNA筛选 模块三：“分子运输车”——运载体 质粒 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别。 有切割位点 能复制，并带着插入的目的基因一起复制