石墨烯-DNA电化学传感器对乳腺癌易感1号基因的灵敏度检测研究讲解.docxVIP

石墨烯-DNA电化学传感器用于乳腺癌1号基因灵敏检测的研究 P.Abdul Rasheed , N.Sandhyarani （纳米科学研究实验室，纳米科学与技术学院，国立技术学院科泽科德，加尔各答，喀拉拉邦，印度） 摘要：一种基于石墨烯的电化学DNA传感器已经被开发出来，并用于乳腺癌相关基因BRCA1的低浓度检测。该DNA传感器采用所谓的“三明治”检测方法，即使捕捉探针（DNA-c）和报告探针（DNA-r）与靶探针（DNA-t）在石墨烯修饰的玻碳电极的夹层中进行杂交。报告探针被偶联在金纳米颗粒上，氧化态的金纳米颗粒则被用于靶探针的电化学检测。该传感器的性能用循环伏安法（CV）和计时电流法进行监测，并已经证实其性能是稳定、可重复且灵敏的，而且它可以检测出高达1飞摩尔的BRCA1基因（5.896毫微微克/毫升）。 关键词：石墨烯 电化学生物传感器 DNA传感器 乳腺癌 计时电流法 1.引言 DNA传感器广泛应用于癌症早期和突变检测的诊断测试，以及基因序列分析，法医调查和医疗评估等领域。在各种各样的DNA传感器中，电化学DNA传感器由于其构造简单，成本低，灵敏度高，小型化等优点而极具吸引力且前景广阔。 现在用于固定DNA电极材料各异，包括金电极，修饰电极，其中修饰电极又包括碳纳米管电极和石墨烯修饰的电极等。石墨烯为二维纳米结构，它是一种拥有巨大的潜力电极材料，基于石墨烯拥有比表面积大、导电率高、在室温下的电子迁移率快等优点，其已被广泛用于电化学生物传感器的研究和发展。石墨烯分析能够快速的进行电子转移并为生物分子的固定提供一个无细胞毒性且面积较大的表面。在电催化和传感器方面，在石墨烯/功能石墨烯和生物分子之间通过非共价键的相互作用如π-π共轭或氢键，使石墨烯在连接各种生物分子方面表现出巨大的潜能。单链DNA（ssDNA）通过π键的相互作用直接固定在石墨烯和氧化石墨烯上，研究结果表明，与双链DNA相比，单链DNA和石墨烯有的较强相互作用。此外石墨烯-DNA不易降解，故能够长期保持稳定。 乳腺癌1号基因（BRCA1）是能在人体乳腺细胞和其他组织细胞中表达的一种管护基因。如果乳腺癌1号基因中检测到超过数百个突变基因的话，这就意味着有较大的患乳腺癌的风险。BRCA1基因突变能引起约40%的遗传性乳腺癌和超过80%的遗传性乳腺和卵巢癌。 目前有关于BRCA1与DNA杂交的电化学灵敏度和选择性的检测的报告都已经被报道，这些报道提出了一种基于使用不同的传感器进行无标记检测BRCA1基因的新型格诺磁电化学分析法。另一项研究指出，在乳腺癌BRCA1基因相关的DNA杂交的检测中，与使用未修饰的电极相比，使用多壁碳纳米管（碳纳米管）修饰的玻碳电极（GCE）能使鸟嘌呤的氧化信号增强。此外，基于丝网印刷石墨电极的单壁碳纳米管（SWCNT）可用于DNA杂交的特定BRCA1基因序列的电化学检测。 在本文的研究中，为了检测低浓度的BRCA1基因（靶DNA称为DNA-t）序列，我们制作了一个灵敏度高且结构简单的DNA传感器。该传感器上在5’端氨基的DNA-c固定在石墨烯修饰的玻碳电极上（GCE），其中有一半的DNA-t与DNA-c进行杂交固定，另一半的DNA-t与DNA-r在金纳米粒子上形成共轭。最终通过采用循环伏安法监测金纳米颗粒的电化学氧化来检测DNA-t的浓度。 2、实验方法 2.1 材料 寡核苷酸是在IDT公司（美国最大的代客合成核酸供货商）购买，本研究采用如下的碱基序列： 捕捉链（DNA-c）：5‘ CTT TTG TTC 3’ 目标链（DNA-t) ：5‘ GAA CAA AAG GAA GAA AAT C 3’ 探针链 (DNA-r) ：5 ‘ GAT TTT CTT C 3’ 非互补链 (NC) : 5’CCT TGT TGG ACT CCC TTC T3’ 3碱基错配的互补链 ：(3MM): 5’ CAA CAA AAG CAA CAA AAT C 3’ 石墨粉(20 um), O-(3-羧丙基)-O′-[2-(3-巯基丙酰氨基)乙基]-聚乙二醇(CPEG)，N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，三磺基-N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，都向印度的西格玛奥德里奇购买。氯金酸是从印度的SRL化工公司购买。使用的其他化学品多为分析纯，它们是由印度的菲舍尔科学与默克公司提供。实验的所有过程都使用超纯去离子水。混合缓冲和共轭缓冲液分别用0.1 M NaCl- PBS缓冲液和0.3 M NaCl- PBS缓冲液，0.1 M NaCl- PBS缓冲液由0.1 M NaCl和10mM磷酸盐缓冲液(Ph=7)组成，0.3 M NaCl- PBS缓冲液由0.3 M NaCl和10mM磷酸盐缓冲液(Ph=7)组成。 2