DNA的粗提取和鉴定-2015.5.14.pptVIP

方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物 ⑤ 6 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL ⑥ 7 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦ 8 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧ A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂 9 . DNA 的鉴定 B : (1) 向试管中加入 0 . 015mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2)4 m L 二苯胺试剂 ⑨ ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物 ⑤ 6 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL ⑥ 7 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦ 8 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧ A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂 9 . DNA 的鉴定 B : (1) 向试管中加入 0 . 015mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2)4 m L 二苯胺试剂 ⑨ * 选修I 专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定 DNA的粗提取与鉴定实验一、目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 二、实验思路 1、DNA从哪提取？ 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 三、提取DNA的方法 4、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 5.讨论：①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 6、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 四、DNA的粗提取与鉴定的实验面临的问题 （一）实验材料的选取 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？ 哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。 从核DNA数