DNA的粗提取和鉴定-市级公开课.pptVIP

§5.1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA，去除其他成分 （1） DNA的溶解性 思考1：图中DNA溶解度最小的浓度是多少？ 2.DNA的理化性质 （2） DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。 思考2：如何控制浓度达到让DNA析出的目的？ 0.14 mol/L 向NaCl溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从2mol/L下降到0.14 mol/L （3） DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 （4）特定的颜色反应——鉴定DNA 沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色。 二、实验设计——问题导学 问题讨论1：什么样的材料更适合提取DNA？ 对植物和动物细胞处理的方法是否相同？ 问题讨论2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNA有 哪几种方案，有什么不同？ 问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得 到白色丝状物？ 问题讨论4：鉴定DNA的具体方法是什么？在必修1教材实 验中还用到哪种试剂来观察DNA在细胞中的分布 二、问题导学 问题讨论1：什么样的材料更适合提取DNA？ 对植物和动物细胞处理的方法是否相同？ 选用DNA含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血(加柠檬酸钠防止凝固)； 或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。 对应训练1：你认为下列提供的材料中哪些不适合提取DNA？洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。 答案：大肠杆菌、猪血。大肠杆菌1条DNA，哺乳动物血红细胞不 含细胞核和从多细胞器，没有DNA 问题讨论2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNA有哪几种方案，有什么不同？ 方案一：向滤液中加入2mol/l的NaCl,充分溶解DNA，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使DNA析出直至析出物不再增加，过滤得到DNA析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解DNA去除杂质。再将析出物溶解到2mol/l的NaCl，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积的冷酒精进一步提纯 方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。 方案三：将滤液放在60－75度的恒温水浴箱中保温10－15min,严格控制温度。 问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？ 问题讨论4：鉴定DNA的具体方法是什么？在必修1教材实验中还用到什么别的试剂用来鉴定DNA呢？ 加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为95%，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。 先将丝状物溶解于2mol/l的NaCl溶液中溶解，再加入4ml二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。 三、书写DNA粗提取和鉴定的主要步骤 要求：先写一句概括性话语，具体细节只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中DNA在哪里？ 1、材料的选择 2、破碎细胞释放DNA 3、去除滤液中的杂质 4、DNA的析出与鉴定 DNA含量丰富的细胞 含核物质DNA的滤液 DNA再溶解在2mol/lNaCl中 向2mol/lNaCl 中加入冷酒精，让DNA析出物在沸水浴下与二苯胺反应 显蓝色 1．填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。 ⑴提取鸡血细胞中核物质： ⑵溶解核内DNA： ⑶析出2mol/LNaCl溶液中的DNA： ⑷DNA白色丝状物的析出： ⑸DNA的鉴定： 四、典型例题 蒸馏水 2mol/LNaCl 加入蒸馏水 95%冷酒精 沸水浴中与二苯胺反应 2、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（ ） A．经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少， 使红细胞破裂数量少B．未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致DNA含量少，染色 时间不够C．选择鸡血液时，选用鸡血细胞液， D．用NaCl溶液进行盐析时，所配制的NaCl溶液浓度达不到