分子与基因工程-生物技术-复习题教案讲解.docVIP

1、简述rRNA在肽链合成中的作用？ 功能是作为mRNA的支架，使mRNA分子在其上展开，形成肽链 分别说出5种以上RNA的功能？ tRNA：转运RNA，是用来翻译过程中运输氨基酸。 rRNA:核糖体RNA，构建核糖体的成分。 hRNA：小发卡结构RNA，是生成mRNA的前体RNA，也是在DNA干扰中起作用。 micRNA:反义RNA,对基因的表达起调节作用。 3、基因工程载体的必备条件是什么，列举三种以上的常用载体。 必备条件：a具有对受体细胞的可转移性b具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点c具有较高的外源DNA的装载能力d具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点e具有合适的筛选标记 常用载体：噬菌体，质粒，病毒DNA，噬菌粒 4、什么是报告基因，举例说明报告基因在分子生物学研究中的二种以上的用途？ 报告基因: 是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。 β-D-葡萄糖苷酶基因，该酶催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸，它在植物体中几乎无背景，组织化学检测很稳定，可用分光光谱、荧光等进行检测。cat基因作为报告基因，检测时可通过放射自显影观察。荧光酶基因作为报告基因，具有检测速度快、灵敏度比cat基因高30～1000倍、费用低、不需使用放射性同位素等优点 5、请列举三种以上检测基因表达的方法? 抗药性筛选、营养缺陷型筛选、显色筛选 6、以色氨酸操纵元为例说明衰减子如何控制基因转录？ 在trp?mRNA?5端trpE基因的起始密码前有一个长162bp的mRNA片段被称为前导区,研究发现,当mRNA合成起始以后,除非培养基中完全没有色氨酸,转录总是在这个区域终止,产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子,终止trp基因转录.因为转录终止发生在这一区域,并且这种终止是被调节的,这个区域就被称为弱化子. T当培养基中色氨酸的浓度很低时,负载有色氨酸的tRNATrp也就少,这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢,当4区被转录完成时,核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的trp密码子处）,这时的前导区结构是2-3配对,不形成3-4配对的终止结构,所以转录可继续进行,直到将trp操纵子中的结构基因全部转录 S：目的：是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。原理：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单练DNA或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段。步骤：待测核酸样品的制备→待测DNA样品的电泳分离→凝胶中核酸的（碱）变性→southern印迹→southern杂交→杂交结果检测 N：目的：主要用于分析检测特异性RNA。原理：Northern杂交是利用DNA可以与RNA进行分子杂交来检测特异性RNA的技术，首先将RNA混合物按它们的大小和分子量通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，分离出来的RNA转至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与放射性标记的探针杂交，通过杂交结果可以对表达量进行定性或定量。步骤：RNA混合物进行琼脂糖凝胶电泳→分离得到的RNA转膜→与放射性标记的探针杂交 →结果分析。 8、 “生物进化过程中，最早出现的生物大分子是RNA，而不是DNA和蛋白质，即在进化某个阶段有一个RNA世界 最早出现的简单生命体中的生物大分子，应是既具有信息载体功能又具有酶的催化功能，因此，最早的生物大分子。进化之初是RNA的世界，RNA可以一身二任，既能保存信息，又能提供酶活性，因此仅有RNA也足以把早期的进化引向新的阶段。 9、为实现外源基因在原核生物中高效表达，应考虑哪些因素？ 启动子（启动子要有可控性，用启动能力强的启动子） 终止子（用终止作用强的终止子） 核糖体结合位点（用含有与启动子来源相同的核糖体序列结合位点） 密码子（解决密码子的偏爱性） 质粒拷贝数（重组质粒的扩增要可控） 10. 描述DNA滚环复制过程及其特征。 环状DNA可以采取上述典型的DNA复制方式进行复制，即从复制起点开始，双向同时进行，形成θ样中间物，故又称θ型复制，最后两个复制方向相遇而终止复制。但有些环状DNA采用另个一种方式，即滚环复制。例如许多病毒DNA的复制、F因子在接合(conufgation)转移时其DNA的复制，以及许多基因扩增时都采用这种方式。 在以这种机制进行的复制中，亲代双链DNA的一条链在DNA复制起点处被切开，其5端游离出来。这样，DNA聚合酶Ⅲ便可以将脱氧核糖核苷酸聚合在3-OH端。当复制向前进行时，亲代DNA上被切断的5端继续游离下来，并且很快被单