第三节蛋白质一级结构详解.pptVIP

三、天然存在的活性肽 激素：胰岛素：含两条肽链（分别含30aa 和21aa） 催产素（8肽） 加压素（8肽） 抗生素：短杆菌肽S（环状10肽） 放线菌D（含2个环状5肽） 毒素：??-鹅膏蕈碱（环状8肽） 四、蛋白质的一级结构举例 [英] Sanger 等，1953 五、蛋白质分子氨基酸顺序的测定 测定蛋白质分子中多肽链的数目 拆分蛋白质分子的多肽链 断裂多肽链的二硫键 测定多肽链的氨基酸组成 分析多肽链的N末端和C末端残基 将多肽链断裂成肽段，并分离 测定各个肽段的氨基酸顺序 确定肽段在多肽链中的次序 确定原多肽链中二硫键的位置 六、蛋白质的一级结构与生物功能 The sequence of amino acids in a protein can offer insights into its three-dimensional structure and its function, cellular location, and evolution. （一） 同源蛋白质的物种差异与生物进化 指在不同有机体中实现同一功能的蛋白质。 （三）一级结构的局部断裂与蛋白质激活 （七）肽段在多肽链中次序的决定—重叠肽法 例：一个9肽，胰蛋白酶降解的肽段 Tyr-lys Glu-Met-leu-Gly-Arg Ala-Gly CNBr降解的肽段 Tyr-lys-Glu-高Ser内酯 leu-Gly-Arg-Ala-Gly 该9肽的aa顺序为：Tyr-lys-Glu-Met-leu-Gly-Arg-Ala-Gly 返回 （八）二硫键位置的确定— 对角线电泳 （diagonal eletrophoresis） Fig. 1-16 Illustration of Diagonal electrophoresis 过甲酸（HCOOOH） 例： 从下列信息推导多肽的氨基酸顺序。 (a)酸水解得Ala, Arg, Leu, Met, Phe, Thr, 2Val (b)Sanger试剂处理得DNP-Ala (c)胰蛋白酶处理得2个肽段，Ala, Arg, Thr和 Leu, Met, Phe, 2Val, Sanger 试剂处理分别得DNP-Ala和DNP-Val (d) 以CNBr处理，得两个肽段Ala, Arg, 高Ser内酯, Thr, 2Val 和Leu, Phe。 Sanger试剂处理分别得到DNP-Ala,DNP-Leu N 端 1 2 3 4 5 6 7 8 C 端 Ala Thr Arg Val Val Met Leu Phe Identification of the amino-terminal residue can be the first step in sequencing a polypeptide. Sanger’s method or Edman degradation can be used. 2. Breaking disulfide bonds Disulfide bonds(二硫键）, if exist, need to be broken first. The disulfide bonds can be reduced by dithiothreitol (DTT, 二硫苏糖醇) or b-mercaptoethanol(巯基乙醇). 3. Determine the amino acid composition 4. Polypeptide chains are cleaved into short fragments by chemical or enzymatic methods and then sequenced by Edman method. 3.1 Cyanogen bromide (CNBr) cleaves polypeptides on the carboxyl side of methionine residues. 3.2 A set of proteases clea