狗蚁草不同萃取部分含药血清对HSC―T6细胞增殖的影响.docVIP

狗蚁草不同萃取部分含药血清对HSC―T6细胞增殖的影响 　　【摘 要】 目的：探究狗蚁草不同萃取物对肝星状细胞（HSC-T6）增殖的影响。方法：制备狗蚁草不同溶剂萃取物的含药血清，通过MTT法检测含药血清对肝纤维化体外模型HSC-T6增殖的影响。结果：狗蚁草乙酸乙酯萃取物10%、5%、2.5%含药血清、95%乙醇提取物10%含药血清对HSC-T6细胞增殖有抑制作用。结论：狗蚁草乙酸乙酯萃取物和95%乙醇提取物能够抑制HSC-T6细胞的增殖，其中狗蚁草乙酸乙酯萃取物活性优于95%乙醇提取物。 中国论文网 /6/view-7226251.htm 　　【关键词】 狗蚁草；肝纤维化；肝星状细胞 　　【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0023-02 　　狗蚁草为豆科链荚豆属植物狗蚁草Alysicarpus vagnalis（Linn.） DC.的全草，又名练荚豆、假花生、山土豆、大叶青等，主要分布于广西、广东、海南、云南等地[1]。狗蚁草性凉，味甘、苦，具有去腐生肌、活血通络、清热化湿的功效，临床用于治疗筋骨酸痛、慢性肝炎、跌打损伤等[2]。狗蚁草为广西的道地药材，民间用其来治疗慢性肝炎，但迄今为止，狗蚁草抗肝纤维化作用的研究在国内外未见有报道。实验通过肝纤维化体外HSC-T6细胞模型来研究狗蚁草不同溶剂萃取物的抗肝纤维化活性。 　　1 仪器与材料 　　1.1 药材 狗蚁草由广西中医药大学药用植物教研室韦松基教授鉴定为豆科植物链荚豆Alysicarpus vagnalis（Linn.） DC.的全草。 　　1.2 实验动物 昆明种小鼠（清洁级）48只，雌雄各半，体重（20±2）g，由广西中医药大学实验动物中心提供，合格证号：桂医动字第11004号。 　　1.3 细胞株 HSC-T6细胞购买于上海博蕴有限公司。 　　1.4 材料 石油醚（分析纯，批号成都市科龙化工试剂厂）；氯仿（分析纯，批号成都市科龙化工试剂厂）；正丁醇（分析纯，批号成都市科龙化工试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯，批号：201305040，成都市科龙化工试剂厂）；DMSO（批号：020120709370，Amresco）；青链霉素混合液（批号：1491907，Gibco）；胎牛血清（批号：121005，浙江天杭生物科技有限公司）；MTT（批号：410c051，Solarbio）；秋水仙碱（批号：C8190，北京索莱宝科技有限公司）。 　　1.5 仪器 Epoch酶标仪（美国BIO-TEK公司）；311型CO2培养箱（美国ThermoForma公司）；TB-215型丹佛精密天平（德国赛多利斯公司）；HVE-50型自动高压灭菌器（日本HIRAYAMA公司）；DLE560型超净工作台（荷兰Clean Air公司）；明澈-D 24 UV超纯水仪（法国默克密理博公司）；G3型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）。 　　2 实验方法 　　2.1 含药血清的制备 取狗蚁草干燥药材，剪碎，称重，置于开口反应器中加适量95%乙醇浸泡过夜，次日加入药材12倍量的95%乙醇，回流提取3次。依次保持微沸状态2、1.5、1h，过滤，合并3次滤液，减压浓缩，干燥，得95%乙醇部位提取物。将95%乙醇提取后的药材晒干，加入12倍量纯水，按上述95%乙醇的提取步骤进行提取，得到水提物。取适量95%乙醇提取物，加水溶解，依次用用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩提取液，干燥，得狗蚁草石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。取昆明种小鼠48只，雌雄各半，随机分为空白对照组、秋水仙碱组、95%乙醇提取物组、石油醚萃取物组、氯仿萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组、水提取物组，每组雌雄各3只。阳性对照组给秋水仙碱0.8mg/kg，空白对照组给纯水，其余各组给予相应药物，灌胃给药，给药剂量均相当于生药量112 g/kg，灌胃容积均为20ml/kg，连续5d，每天2次。最后一次给药（灌胃前禁食不禁水12h）1h后，摘眼球取血，3000rpm离心10min，取上清，于56℃下温育30 min灭活，过滤除菌。每组药物含药血清设10%、5%、2.5%三个浓度，5%和2.5%含药血清组再分别加入5%和7.5%空白对照小鼠血清，使各组培养液总血清含量均为10%[3]。 　　2.2 对HSC-T6细胞增殖的影响 取处于对数生长期的HSC-T6细胞，消化制成单细胞混悬液，取适量混悬液，用0.4%Trypan Blue染色，在显微镜下计数，活细胞百分数应大于90%。调整细胞浓度至5×103个/ml，取细胞悬液接种于96孔板中，100μl/孔，37℃、5% CO