第六章植物的离体微繁详解.pptVIP

外植体：外植体类型及大小 培养的环境条件：光照、温度、湿度、pH值。 培养基成分：Ms培养基是控制玻璃化发生较理想的培养基，培养基中增加K、P、Fe、Ca、Mn、Zn元素的含量，降低B含量，增加硝态氮，降低铵态氮，可起到降低玻璃化率的作用。 玛卡 选择合适的外植体：玻璃化苗绝大多数为来自茎尖或茎切段培养物的不定芽。 改善培养基组成：适当降低培养基中NH4+浓度，适当添加IAA、GA3、ABA，减少BA用量均可降低玻璃化苗的发生频率。 改善培养条件：适当提高培养时的光照强度，延长光照时间，降低培养容器内的空气相对湿度，改善供氧状况，采用有透气膜的培养容器等培养条件的改良均可以降低玻璃化苗的发生频率。 实践证明，茎尖分生组织是遗传学上最稳定的部分，通过顶芽和腋芽繁殖途径进行增殖是最能保持原品种优良特性的繁殖方式. 变异的白花贝母兰 白花贝母兰组培苗 6.5.4.1 来源： 植物材料本身（表面、内生菌）； 在无菌操作和培养过程中由外界环境 进入培养容器而引起的。 6.5.4.2 污染的症状： 2～3d产生菌落——表面灭菌不彻底； 3～5d后陆续产生——内生菌所致。 6.5.4.3 污染所引起的危害： 引起早期培养的失败，试管苗生长速度减慢、生活力下降、增殖效率降低、玻璃苗增加及生长不均匀、叶片失绿甚至死亡等；在后期导致试管苗移栽困难和死亡；污染也会引起培养物的遗传变异。 供体材料的选择：尽可能使用温室和人工气候条件中培养的健康、无病虫害植物作材料。 培养物的检测：特别要注意培养物和培养基接触的部分。 合理的扩繁殖程序：将最初的无菌培养物中一部分作为“原原种”进行专门保存，分批繁殖和复检后再进行大规模生产。 严格无菌操作规程 抗菌素：弄清楚要抑制菌的种类；使用的抗生素是否对培养的植物组织有不良影响；还要确立抗生素的使用浓度、处理时间的长短。 希望采取一些措施恢复无菌状态，方法之一是使培养物在试管内长成小植株后移栽，待它生长成健壮的幼苗后再重新消毒接种。另一种方法在一个较大的容器中生长，适当降低容器中的相对湿度，待植株长到一定高度后取较大的茎尖重新消毒接种，但这种方法对已污染的愈伤组织和有内生菌的材料将不起作用。 6.6.1 试管微茎的概念 试管微茎（microstem）是利用植物细胞全能性原理，在离体培养条件下，通过对培养条件及培养基的调整，诱导植物的离体组织或试管苗在容器内形成微型变态茎的植物离体培养技术。 百合试管小鳞茎、半夏试管茎、魔芋试管微球茎、郁金香试管鳞茎、马蹄莲试管块茎、怀山药试管块茎、芋试管球茎、试管姜等相继诱导成功。 变态茎 试管微茎的意义在于与试管苗相比具有几个重要的特点： （1）试管微茎可以由脱毒苗形成，具有试管微繁的所有特点，同时更方便运输； （2）利用试管微繁技术诱导试管茎，对于深入研究试管茎的形成、发育和调控机理，揭示植物地下茎形成机制等都具有十分重要的意义； （3）试管微茎是进行植物遗传转化的良好受体。 液体培养体系 固液双层培养体系 固体直接诱导培养体系 液体和固液双层培养体系诱导培养60d，固体直接诱导培养30d后，可以获得试管微薯。 外植体 培养基：提高培养基中P和K、Ca的供应比例有利于提高试管茎产量；在原MS基础上将锰增加1倍，铁和铜增加0.5倍可显著提高马铃薯试管薯的产量和品质（李会珍，2003）。 激素：主要有6BA、NAA、IAA、BAP、CCC、SA和多效唑等。 糖的种类和浓度：大多以蔗糖为碳源，浓度30～90 g/L 温度和光照：荸荠在18℃时形成的试管球茎数最多，鲜重最大；马铃薯在诱导结薯阶段温度为18～20℃。 马铃薯茎段在固体MS培养基（MS十3%蔗糖+0.8%琼脂）中培养21d（光强2000 Lx、光周期16 h/d、25士1℃）后，转入液体诱导结薯培养基（MS+5 mg/L BA十500 mg/L CCC+8%蔗糖），全黑暗条件下诱导结薯。 6.7.1 无糖微繁的概念 无糖微繁，又称光自养微繁，是指在一个相对大的培养空间（培养间和大型培养容器），采用人工环境控制手段，用CO2替代糖作为碳源，提供植株生长适宜的光、温、水、气、营养等条件，促进植株的光合作用，从而促进植物增殖、生长和发育的技术。 在开放的无糖环境下,进行植物离体微材料的快繁,可以实现幼茎的生根及胚状体的分化,以下图片在是无糖光自养体系中培育小苗.要求比常规快繁更严格的环控技术及生物调控技术. 特点：在植物微繁殖的过程中，培养基中不用添加糖和生长调节物质，只是通过提高培养空间的光照度、CO2浓度、温度和湿度，以及气流交换速度等来