叶绿体色素的提取、分离及理化.ppt

叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定 实验原理 叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇提取。 分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。纸层析是其中最简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相(即流动相和固定相)间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。 材料、器材与试剂 植物材料 根据季节从市场上购买新鲜的菠菜，芹菜或油菜，选取其中之一新鲜绿叶作为实验材料。也可以从校园内采集其他植物新鲜绿叶。 器材 大试管（20*200）、台秤、研钵、剪刀、量筒、漏斗、分液漏斗、软木塞、烧杯、 新华滤纸、小试管若干、分光计、酒精灯、吸耳球、移液管、电吹风、毛细管 试剂 95%乙醇、碳酸钙、石英砂、汽油、苯、KOH、甲醇、醋酸铜、盐酸 实验步骤 叶绿体色素的提取与分离 ①称取新鲜去大叶脉的菠菜叶片（或其他植物叶）5g，剪碎放入研钵中，加入乙醇10ml、少许CaCO3(中和细胞中的酸防止Mg2+从叶绿素中心释放)和石英砂，研磨成匀浆，再加入适量的乙醇（10-15ml），然后用漏斗过滤，即得叶绿体色素液。 ②取准备好的滤纸条（2*20cm）,将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条。 ③用毛细管吸取叶绿体色素提取液点于滤纸的下端窄条的上方中央，注意下一次所点溶液不可过多，如色素过淡，用电吹风吹干后再重复1-2次。 ④在大试管中加入汽油5-10ml(或其它层析液，如石油醚:丙酮:苯为20:2:1的混合溶液可作层析液)。然后滤纸条上端固定在软木塞上，插入试管内，使窄条进入溶液中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处（或试管外套一黑纸套）。 ⑤经0.5-1h后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色的是胡萝卜素，其次为叶黄素，于下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b. 叶绿体色素的理化性质 ①叶绿素的荧光现象： 　　取叶绿体色素提取液少许于1支试管中，用反射光和透射光观察提取液的颜色有何不同，反射光下观察到的提取液颜色即为叶绿素产生的荧光颜色。 ②黄色素（胡萝卜素和叶黄素）与绿色素（叶绿素）的分离： 取叶绿体色素提取液5ml,加到盛有2ml KOH甲醇溶液的分液漏斗中，摇动分液漏斗，加入1mlDW，再加入5ml苯，轻轻摇动分液漏斗，静置片刻，溶液即分为两层。上层是黄色素，下层是绿色素，分别保存于试管中。 ③观察色素溶液的吸收光谱： 　　a.调节分光计，观察日光的光谱。 　　b.观察下层绿色部分的吸收光谱 　　c.观察上层黄色部分的吸收光谱。 * 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜 素 叶绿素b 叶绿素a 叶黄素 左：透射光下 右：反射光下 类胡萝卜素 叶绿素 *