菌种的传代与保藏要点讲解.pptxVIP

菌种的传代与保藏霞峰化学;; 如药品中的控制菌检查使用的阳性对照菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保证达到菌种长期正确的形态；;二、菌种代号的意义;三、常用菌种保藏方法; 选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地 保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济 和简便。在实际工作中，往往多种条件同时使用, 以提高保藏效果。 （二）菌种保藏步骤 ① 挑选特征典型的纯菌菌落； ②确定保藏的合适菌体形态； ③ 选择最适宜的保藏方法； ④定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。 ;1.琼脂斜面低温保存法 ;大肠杆菌斜面 金黄色葡萄球菌斜面; 生孢梭菌 白色念???菌需气菌、厌气菌培养基 真菌培养基;各类菌种保藏条件及时间;（3）特点： 优点是——简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用。 缺点是——保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。 ;（4）注意事项： 保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。 保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。 必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。 每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。 保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 %为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。 铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。 ;  2、液体石蜡保存法： 本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。; 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端 1 ㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。 适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。 ;液体石蜡对各类菌种保藏效果;（3）特点： 本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法， 该法主要使菌种与空气隔绝。 （4）注意事项： ① 保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征 后，方可进行保藏。 ② 保藏过程中，需经常观察斜面是否干燥，如干燥， 需重新移种。 ③ 使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一 边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培 养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上 即可使用。;④将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染。 ⑤液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1 ㎝为宜。?????? ⑥制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多，否则分装到菌种培养基中易造成污染。 ;3、半固体琼脂培养基（0.5%） 4、40%甘油保存法： ;四、试验用菌种的培养传代方法; 1 菌种的复苏 ?把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。 ?先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。 ; ? 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面置35~37℃培养22~24 h。 ? 取出培养物，仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，转种3 代即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。 ;2 菌种的传代与保存;? 堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，