13-14基因工程的应用和蛋白质工程(个人原创2015)精要.pptVIP

基因诊断 基因诊断也称为DNA诊断或基因探针技术，即在DNA水平分析检测某一基因，从而对特定的疾病进行诊断。如用白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的DNA探针，可以用来检测白血病。 探针制备：放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的DNA分子； 原 理：利用DNA分子杂交原理 通过物理化学与生物化学等技术了解蛋白质的结构与功能，并借助计算机辅助设计、基因定点诱变和重组DNA技术改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质的技术。其中基因工程是关键技术。 因此蛋白质工程又被称为第二代基因工程。 蛋白质工程的概念 原理: 改造基因（基因修饰或基因合成） 二、蛋白质工程的基本原理 由于基因决定蛋白质，因此，要对蛋白质的结构进行改造，最终还必须通过基因来完成。 通过基因工程来改造蛋白质 原理: 改造基因（基因修饰或基因合成） 二、蛋白质工程的基本原理 由于基因决定蛋白质，因此，要对蛋白质的结构进行改造，最终还必须通过基因来完成。 预期蛋白质功能→设计 预期的蛋白质 →推测应有的 氨基酸 序列→找到对应的脱氧核苷酸序列。 途径: 预期 功能 DNA合成 分子设计 蛋白质 三维结构 氨基酸序列 多肽链 基因 DNA mRNA 生物 功能 转录 翻译 折叠 蛋白质工程流程图 中心法则 蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的。而蛋白质工程的过程却与之相反。 蛋白质工程的主要步骤 从生物体中分离纯化目的蛋白； 测定其氨基酸序列； 借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构; 设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响； 设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变； 分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。 讨论 某多肽链的一段氨基酸序列是：…—丙氨酸—色氨酸—赖氨酸—甲硫氨酸—苯丙氨酸—… （1） 怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？请把相应的碱基序列写出来。 （2）确定目的基因的碱基序列后，就可以根据人类的需要改造它，通过人工合成的方法或从基因库中获取。 每种氨基酸都有对应的三联密码子，只要查一下遗传密码子表，就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码，因此其碱基排列组合起来就比较复杂，至少可以排列出16种，可以让学生根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出mRNA序列为GCU（或C或A或G）UGGAAA（或G）AUGUUU（或C），再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列：CGA（或G或T或C）ACCTTT（或C）TACAAA（或G）。 提示（1） 提示（2） 确定目的基因的碱基序列后，就可以根据人类的需要改造它，通过人工合成的方法或从基因库中获取。 蛋白质改造工程举例 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。 1．胰岛素改造 2．水蛭素改造 水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，它有多种变异体，由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性，在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体HV2的设计方案，将47位的Asn（天冬酰胺）变成Lys（赖氨酸），使其与分子内第4或第5位Thr（苏氨酸）间形成氢键来帮助水蛭素N端肽段的正确取向，从而提高凝血效率，试管试验活性提高4倍，在动物模型上检验抗血栓形成的效果，提高20倍。 3．生长激素改造 生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育，然而它不仅可以结合生长激素受体，还可以结合许多种不同类型细胞的催乳激素受体，引发其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用，需使人的重组生长激素只与生长激素受体结合，尽可能减少与其他激素受体的结合。经研究发现，二者受体结合区有一部分重叠，但并不完全相同，有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用，而它与生长激素受体结合则无需锌离子参与，于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸侧链，如第18和第21位His（组氨酸）和第17位Glu（谷氨酸）。实验结果与预先设想一致，但要开发作为临床用药还有大量的工作要做。 4．治癌酶的改造 癌症的基因治疗分二个方面：药物作用于癌细胞，特异性地抑制或杀死癌细胞；药物保护正常细胞免受化学药物