HIV感染的实验室检测概要.ppt

HIV抗体检测原理和方法 石嘴山市疾控中心 艾滋病初筛中心实验室 抗原检测的目的 （一）检测早期感染，缩短窗 口期 （可提前1-2周） HIV-P24抗原阳性仅作为HIV 感染窗口期的辅助诊断依据， 不能据此确诊 （二）新生儿的感染 婴幼儿HIV抗体阳性不能用于诊断感染HIV 婴幼儿体内从母亲得到的HIV抗体持续存在时间最长不超过18个月。 在18月龄以前可以用多种不同的非抗体依赖性的检验方法对新生儿HIV感染进行辅助诊断，包括：HIV P24抗原检测、病毒分离培养、RNA或DNA测定。 18月龄以前婴幼儿感染HIV诊断要结合临床表现和实验室综合诊断。 抗体检测的目的 输血和移植安全（为了接受者的安全） 监测(为了知晓人群流行状况) 临床HIV疾病的诊断 (为了知晓个体感染状况） 为了达到以上的某个目的的HIV 检测可能不适合其他目的，比如输血服务的检测不适合临床诊断HIV感染 HIV抗体检测 HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复 检）和确认试验（WB)。 （一）检测试剂 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用HIV-1/2混合型酶联免疫试剂。自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测。 （二）筛查方法 1. 常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA）目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主，国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4-9.1d。其优点在于能同时检测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险度。 酶联免疫吸附试验 Enzyme linked immunosorbent assay ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗体或抗原的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性 。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 ELISA的原理 用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。 ELISA的原理 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA的类型 双抗原夹心法测抗体 双抗体夹心法测抗原 间接法测抗体 竞争法、捕获包被法等 双抗原夹心法测抗体 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。 加受检标本，保温反应。标本中的抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。 加酶标抗原，保温反应。固相免疫复合物上的抗体与酶标抗原结合，彻底洗涤未结合的酶标抗原。 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗体的量。 2、快速检测（RT）及其它检测 随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种： （1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。 PA原理示意图 （PA）检测结果的判定 （2）斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）： 以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。 （3）斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 金标