RNA组学及miRNA概要.pptVIP

NAR 33(2)，2005  Science 309(5732):310-311,2005. 原位杂交技术可以方便的检测miRNA的时空表达的差异 神经系统 肝脏 肌肉 血管和心脏 侧线和感官系统 前肾 3.miRNA的功能的研究方法 ○ 高表达miRNA（转基因） ○ 在体内抑制miRNAs的表达 PLoS BIOLOGY 2(4):E98, 2004 通过对miRNA的合成及功能行使过程所必需的蛋白复合物进行抑制从而降低miRNA的表达 在体内使miRNA的表达量下调 2’-O-甲基修饰的与let7互补的寡核苷酸的导入可以使let7丧失功能，是由于这种带修饰的寡核苷酸的结合封闭了RISK复合体 Nature 423, 2003 针对miRNA的前体的发夹结构设计siRNA降低miRNA的表达量 导入抗miRNA的靶基因，研究miRNA的功能 miRNA 靶基因 启动子 表型 miR164 CUC1 内源 短玫瑰形叶柄，变形的叶片，花瓣增加，萼片减少 miR164 CUC2 导入 变形的叶片，增加了分开的萼片 miR165/166 REV 内源 集中的脉管，叶组织挂在茎上 miR168 AGO1 内源 勺形、卷曲的叶片，增加了miRNA靶基因的表达量 miR172 AP2 35S 减少了花的确定性，花期变晚 miR-JAW TCP4 内源和35S 子叶融合,幼苗生长迟缓,SAM缺乏,管形 miR-JAW TCP2 35S 长配轴，小叶片，顶点优势减少 miR159 MYB33 35S 上卷叶片 Curr.Opin.Chem.Biol. 7(4):516-523. 1. 染色体重塑 2. DNA甲基化 3. 转录 4. RNA 加工 5. RNA 稳定性 6. RNA 转运 7. RNA定位 8. 翻译 9. 蛋白质活性 10. miRNA 稳定性 miRNAs可能参与各种基因表达过程的调控 谢谢 * * * * Left figure: sensitivity and dynamic range assay by a synthetic 21-nt RNA. Right figure: panel A, the position indicator of probes; panel B, a primary image of the model microarray scaned by a PerkinElmer’s scaner * * Here should be noted that small deffernce is usual between microarray and northern blots. In these cases, it is generally considered that northern blots is more credible than microarray. This reminds us to take care in using the data from microarrays. ○ 第一种以线虫lin-4为代表，作用时与靶基因不完全互补结合，进而阻遏翻译而不影响mRNA的稳定性，这种miRNA是目前发现最多的种类。 ○ 第二种以拟南芥miR-171为代表，作用时与靶标基因完全互补结合，作用方式和功能与siRNA非常类似，最后切割靶mRNA，这说明某些miRNA和siRNA一样参与了机体内一些特异性mRNA的剪切过程。 ○ 第三种以let-7为代表，它具有以上两种作用模式，当与靶基因完全互补结合时，直接靶向切割mRNA，如果蝇和Hela细胞中let-7直接介导RISC分裂切割靶mRNA；当与靶标基因不完全互补结合时，起调节基因表达的作用，如线虫中的let-7与靶mRNA3′端非翻译区不完全配对结合后，阻遏调节基因的翻译。 ○ 第四种作用时与靶基因3’非翻译区结合，进而影响mRNA的稳定性。 4. miRNA对靶基因的作用模式 miRNA是基因调控网络的一个关键成分, 能调控大量的靶基因的表达。 miRNA功能 发育 分化 细胞增殖、死亡 细胞凋亡 肿瘤发生 代谢 病毒性疾病 1. 染色体重塑 2. DNA甲基化 3. 转录调控 4. RNA 加工 5. RNA 稳定性 6. RNA 转运 7. RNA定位 8. 翻译 9. 蛋白质活性 10. miRNA 稳定性 miRNA功能研究方法 Tissues/cells Dicer mutants global miRNA knockout miRNA identification miRNA overexpression miRNA silencing Rescue Micro