XDNA重组技术的基本工具概要.ppt

随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序 列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切 割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 8、（多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传 性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 14、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因 的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 15、基因工程常用的受体细胞有（ ） (1)大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） 9、下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 答案：D 10、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的 是（ ） A、①② B、①③ C、①④ D、②③ T C G A G C T T A A A G G T T C C A A G C T T C A G A A T T C G ③ ① ② ④ 11、下列哪一种酶是基因工程的工具酶 A、DNA连接酶 B、DNA酶 C、RNA酶 D、运载体 A A 12、下列不适合用于基因工程的运载体 是（ ） A、质粒 B、噬菌体 C、细菌 D、病毒 C 13、下列说法正确的是：（ ） A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、重组技术所用的工具酶是限制酶、 连接酶、运载体 D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因 进行大量复制的过程可称为“克隆” D A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 * DNA连接酶的种类 种类 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 作用 将双链DNA片段“缝合起来”，恢复被限制性内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 区别 只能连接 黏性末端 黏性末端和 平末端都能连接 * * 2个 4个 1、每连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？ 2、用限制酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？ 思考： 2.为什么限制酶和DNA连接酶在微生物中能够分离到,而高等植物和动物中没有? 原核生物容易受到自然界外源DNA的 入侵，但是生物在长期的进化过程中形成 了完善的防御机制，以防止外来病原物的 侵害。 限制性核酸内切酶就是细菌的防御性工 具，当外源DNA侵入时，限制性核酸内切 酶会将外源DNA切割掉，以保证自身的安 全。 所以，限制性核酸内切酶在原核生物中 主要起到切割外源DNA、使之失效，从而 保护自身的作用。 载体的作用 载体的必要条件 载体的种类 阅读课本第6页“分子运输车——运载体”的相关内容，填写下表 自主学习三 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 1）作为运载工具，