DNA重组技术的基本工具(个人原创)概要.pptVIP

1.1 DNA重组技术的基本工具 2014-12-24 一、基因工程的概念 二、基因工程的基本工具 1、来源： 2、作用部位： 3、特点： 二、基因工程的基本工具 1、来源： 2、作用部位： 3、特点： 4、末端种类： 5、常见的限制酶： 1、作用： 2、种类： 3.基因进入受体细胞的运载体—”分子运输车” 1、作用：①作为运载工具，将外源基因转移到受体细胞中去。（但一般需要人工修饰） ②利用运载体在受体细胞内，对外源基因(目的基因)进行大量复制。 3.基因进入受体细胞的运载体—”分子运输车” 2、条件：①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 ②载体DNA必须有一个或多个限制酶切点。 ③具有某些标记基因，便于进行筛选,如抗菌素的抗性基因等。 ④质粒的存在对宿主细胞无影响。 3.基因进入受体细胞的运载体—”分子运输车” 3、种类：质粒和λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒 小结 Thank You! * 1、原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。 （补充） ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。 能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 编码区: 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列.包括启动子和终止子 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 1、原核细胞的基因结构 （补充） 2、真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程：指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 原 理： 操作水平： 操作环境： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 生物体外 定向地改造生物的性状，获得人类所需要的品种 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 1. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 原核生物 磷酸二酯键 特异性--能够特异性识别DNA分子中特定的核苷酸排列顺序，并能切开特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 磷酸二酯键 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 G P A P 限制性核酸内切酶作用的化学键 磷酸二酯键 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 A T G G C A T C T T C G A A G P A P 1. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 原核生物 磷酸二酯键 特异性--能够特异性识别DNA分子中特定的核苷酸排列顺序，并能切开特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 黏性末端和平末端 EcoRI和SmaI ECORⅠ限制酶的作用 点击播放 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 ECORⅠ限制酶的作用 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 平末端 2. DNA连接酶——“分子缝合针” 将目的基因与运载体的DNA片段连接在一起，恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶 氨苄青霉素抗性基因 质粒 拟核 大肠杆菌细胞 目的基因插入位点 复制原点 质粒：是一种裸露的,结构简单,独立于细菌拟核之外,并能够自我复制能力的双链环状 DNA 分子。一般存在于原核细胞，某些真核细胞中也存在。 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切