DNA重组技术的基本工具(公开课)好概要.pptVIP

基因工程 问题探讨：基因工程培育抗虫棉 苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　 让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　(2)导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　(3)有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒 　 (2)假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 　(3)目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 有切割位点 能复制并带着插入的目的基因一起复制 质粒——裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 最常用运载体——质粒 实际上在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 1.下列关于限制酶的说法正确的是 A．限制酶广泛存在于各种生物中，但原核生物 中很少 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 2．下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是 A．DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢 键 B．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上 的磷酸和脱氧核糖 C．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上 的磷酸和核糖 D．同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端 3．在胰岛素的基因与质粒形成重组DNA分子的过程中，下列哪组是所需要的 ①同一种限制酶切割两者； ②不需同一种限制酶切割两者； ③加入适量的DNA连接酶； ④不需加DNA连接酶 A．①③ B．①④ C．②④ D．②③ * * 专题1 基因工程的产物 如果我也能捉老鼠就好了！ 这些定向改造基因 的设想能实现吗？ 基因工程 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 基因重组 基因工程的概念 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 抗虫棉的培育有哪些关键步骤？ 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤及其工具： 关键步骤一： 在体外对含有抗虫基因的DNA分子进行切割 关键步骤二： 抗虫基因与普通棉花的基因进行连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(普通棉花）细胞 基因的剪刀——限制酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——载体 主要是原核生物 4000种。 1、来源： 2、种类： 一、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 §1-1 DNA重组技术的基本工具 以大肠杆菌细胞内获得得ECOR1为例 能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且准确地在每一条中特定部位的两个核苷酸之间切割。 3、作用： A T G G C A T C T T C G A A 磷酸二酯键： 即连接脱氧核糖、磷酸之间的化学键 中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 黏性末端 平末端 4、结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端。 思考? ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 同一种 （二）DNA连接酶 分子缝合针 1、作用部位：磷酸二酯键 G A A T T C C T T A A G G P A P 2、作用：把两条双链DNA片段 之间的缝隙“缝合”起来。 两